CyclinG2调控雌激素介导的细胞成骨分化作用和其分子机制研究.pdfVIP

调控雌激素介导的细胞成骨分化作用及其分子机制研究·中文论著摘要·???刖所致雌激素骤减是目前公认的绝经后骨质疏松症发生发展的重要原因。雌激素通过雌激素受体依赖途径调控间充质干细胞向成骨方向分化、抑制脂肪细胞形成、调控骨重建的平衡，但具体作用信号途径和机理至今尚未完全清楚。在肿瘤细胞中抑制经典??藕磐?坊钚?????籧??经典??藕磐?吩谏?锏慕???讨屑?1Ｊ兀?谙赴?鲋场⒎只?芭??????不能进入泛素化途径降解。?甤???谙赴??谐中?刍?龆嗟揭欢ㄋ?平后，转移入细胞核内，与?赴?蜃樱?馨驮銮恳蜃????昂随着全世界范围内老龄化问题的加剧，骨质疏松症正成为全世界各国越来越关注的重要问题。绝经后骨质疏松症的发病机制较为复杂，绝经后卵巢功能衰竭雌激素受体途径是雌激素发挥作用的重要通路，雌激素与雌激素受体结合并转运入细胞核，激活启动子区域包含雌激素感应元件??????????，???陌谢?颍?嘤??虮泶锊⒅葱邪?ǖ骺爻晒欠只?谀诘南赴?生物学功能。周期素????????虻钠舳?忧?虬??／???位点，能够与雌激素及雌激素受体复合物结合并抑制其??转录和蛋白表达，提示?可能参与了雌激素调控的某些生物学功能。????是一种非经典的细胞周期素????，具有抑制细胞周期及细胞增殖的作用。本课题组发现?能够抑制肿瘤细胞的克隆形成能力，并进一步研究证实????能够胎的生长发育过程中发挥重要的调控作用。细胞外的??藕欧肿咏岷系较赴?膜上特异性受体????蛋白，使胞内的??????鞍妆患せ睿?种铺窃?铣?激酶一?????????一?，????磷酸化????的能力，导致???，??疞??易褰岷喜⒓せ??????谢?虻钠舳?樱?佣??活??????和???染?鋀?信号通路的下游靶基因，进一步发挥????。???／?????????????．?希???? 实验材料和方法?⒊晒翘跫?嘌?汉痛萍に赜盏枷赴?晒欠只??讨校珻????的表达分析?⒊晒翘跫?嘌?骸⒋萍に丶癈????对细胞增殖的影响近年来，有研究发现???????丫，????岷希?舳?掠蜗赴?芍?只?喙匦?疏松症的发生发展中发挥重要的作用，但目前对雌激素与经典??藕磐?分????赴?Q芯慷韵螅?觳釩????对细胞成骨分化的调节作用并阐明其分周期素?的内源表达水平改变；诱导?养液、雌激素对细胞增殖的影响是否依赖于???相应的生物学效应。?能够通过与过氧化物酶体增殖剂激活受体丫号分子表达促进细胞的成脂分化，提示????可能参与细胞成骨的调控过程。另外，经典??藕磐?范猿晒呛统芍?乃?氐鹘谟刖??蠊侵适杷芍⒌?骨量减少而脂肪含量明显升高的现象相一致，表明该信号通路可能在绝经后骨质间的联系、二者是否协同作用于细胞成骨分化的调控及绝经后骨质疏松症的发生发展尚有待进一步证实。本研究拟在发现????抑制经典??藕磐?返幕?∩希??徊窖芯??调控经典??藕磐?返淖饔眉胺肿踊?疲阂跃哂谐晒欠只?芰Φ?子机制；深入分析和验证????对经典??藕磐?返牡骺卦诖萍に氐鹘谙?胞成骨分化过程中扮演的角色，丰富细胞周期及细胞分化调控理论，为研究绝经后骨质疏松症的发生发展与防治提供理论基础。应用成骨条件培养液添加不同浓度的雌激素诱导???赴?晒欠只???别诱导??崛∠赴?躌?和总蛋白，通过?—??蚖?????方法检测?呀庀赴??ü鼳?活性测定试剂盒检测细胞??钚员浠?挥盏????匏?掖脊潭ㄏ赴??τ密缢睾烊旧ǚ?法，检测细胞钙盐沉积能力变化。分别应用成骨条件培养液添加不同浓度雌激素诱导???赴?晒欠只??通过基因转染在细胞中过表达????，加药或转染的第??????捎肅??椒?觳釩??细胞增殖情况，绘制生长曲线，分析成骨条件培?的作用。????????????? 基因表达水平、??钚砸约案蒲纬粱?芰Γ?治鼍?鋀?信号通路在胞，通过??钚圆舛ㄊ约梁屑觳庀赴鸄?活性变化；诱导??过表达对细胞成骨分化能力影响的研究?⒕?鋀?信号通路在????调控细胞成骨分化过程中的作用分析?负性调控经典??藕磐?凡斡氪萍に氐鹘谙赴??骨分化的研究?调节经典??藕磐?坊钚缘淖饔冒械慵胺肿踊??研究在???赴?型ü??蜃H净蚰孀B疾《靖腥荆?瓜赴??泶顲???活细胞中经典??藕磐?坊钚裕??徊窖∪√囟ㄊ奔涞慵觳庀赴?晒欠只??。通过成骨条件培养液诱导细胞成骨分化，转染后??崛∠赴?躌?，检测细胞成骨分化标志????基因表达水平改变：诱导??呀庀赴??觳庀?胞??钚员浠?挥盏????匏?掖脊潭ㄏ赴???缢睾烊旧?觳庀赴?蒲?沉积能力差异。在???赴?泄?泶顲????，通过?．??攵?糠椒ê蚖???方法，检测???赴???????捌湎掠伟谢?騌??表达的影响，通过基因转染和逆转录病毒感染的方法在???赴?泄?泶顲????，应用??激?调节细胞成骨分化过程中