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参与DNA复制有关的酶和蛋白质;;蛋白质名称;蛋白质名称; 1 DNA聚合酶 ? DNA聚合酶 是指以脱氧核苷三磷酸作为底物催化合成DNA的一类酶。 ;;5′ A G C T T C A G G A T A ? 3′ | | | | | | | | | | |;;DNA聚合酶的分类; (1) 大肠杆菌DNA聚合酶I (Pol Ⅰ) 纯的DNA聚合酶I由分子量109 000U (109KD)，含928个氨基酸残基的一条肽链构成，每个大肠杆菌细胞中大约含400个酶分子。(单链多肽） ;323个氨基酸; DNA聚合酶Ⅰ的多种活性。 ① 5′→3′聚合活性： 在模板指导下，以脱氧核苷三磷酸为底物在引物3ˊ-OH末端加上脱氧核苷酸。每个酶分子每分钟添加1 000个单核苷酸。 聚合酶催化的DNA的合成需要以下条件： ▲ 模板 ▲ 四种脱氧核苷酸 ▲必须有一 3′-OH末端的引物，且此引物必须与模板正确形成氢键 ▲合成从5ˊ→3ˊ方向进行，如图7-8和图7-9所示;; ② 3′→5′外切酶活性： 没有脱氧核苷三磷酸底物时， DNA聚合酶 I 能从3′-OH开始以3′→5′方向水解DNA，产生5ˊ-单核苷酸。 实际上DNA复制时，加上去的脱氧核苷酸不一定每次都正确，错误的机会不少，有时甚至加上一个不与模板配对的核苷酸，当3ˊ-OH末端的碱基不与模板配对时聚合酶就无聚合活性，此时它具有的3ˊ→5ˊ外切酶活性可以切除这个不配对的核苷酸，这一碱基切除后，外切核酸酶活性终止，聚合酶活性恢复，如图7-10所示。所以聚合酶的3ˊ→5ˊ外切酶活性也叫修补活性。 ;; ③ 5′→3′外切酶活性： DNA聚合酶I具有5′→3′外切酶活性。 如图7-11，其特点是： ▲ 只能在5ˊ-P末端一个接一个地切除核苷酸； ▲ 能连续地切除多个核苷酸； ▲ 只切除配对的5ˊ-P末端核苷酸，不切除不配对的单链5ˊ-P末端核苷酸； ▲ 既能切除脱氧核苷酸也能切除核苷酸； ▲ 对只具有5ˊ-P末端的切口也有活性（由于在DNA复制过程中一般情况下只在RNA引物处才有缺口，因此5′→3′外切酶活性的主要功能是切除核糖核苷酸引物）。 ; 切口翻译(nicktranslation) DNA聚合酶 I 的5ˊ→3ˊ外切酶活性和聚合活性同时作用可以进行切口翻译(nicktranslation)，用来制造放射性探针。 在反应物里加入同位素标记的脱氧单核苷酸，DNA聚合酶I 首先利用5ˊ→3ˊ外切酶活性，从切口处逐个切下DNA上的核苷酸，再利用3ˊ-OH末端聚合作用逐个将标记的核苷酸加上去(图7—12)。;5; ④ 内切酶活性： DNA聚合酶 I 也具有5ˊ→3ˊ 内切酶活性，如图7-13所示。在两个碱基之间切开产生一个具有5ˊ-P 末端的不配对碱基的片段。 很多实验证明DNA聚合酶 I 在大肠杆菌复制中不是主要的合成酶，而是在除去RNA引物和损伤修复中起重要作用。 ;; （2） 大肠杆菌 DNA聚合酶 Ⅱ DNA聚合酶Ⅰ缺陷的突变株仍能生存，这表明DNApolⅠ不是DNA复制的主要聚合酶。人们开始寻找另外的DNA聚合酶，并于1970年发现了DNApolⅡ。 ① 从5′→3′方向合成DNA ② 具有3ˊ→5ˊ外切酶活性，但没有5ˊ→3ˊ外切酶活性。 在体外的合成速率比体内的速率要低得多，带有这个酶缺陷的大肠杆菌突变株染色体的复制各方面都正常，它在体内的功能可能和DNA聚合酶 I 类似。 ; (3) 大肠杆菌DNA聚合酶Ⅲ ▼聚合酶Ⅲ是体内DNA复制所必需的酶 带有DNA聚合酶 Ⅲ 的温度敏感突变 (polc) 的大肠杆菌在限制温度下是不能存活的，从这种菌株得到的裂解液也不能合成DNA，当加入正常细菌的DNA 聚合酶Ⅲ 时可以恢复它的聚合能力，因此不同于DNA聚合酶I和Ⅱ，聚合酶