表达TIPE2腺病毒载体的构建和其对结肠癌细胞增殖的影响.pdf

表达 TIPE2 腺病毒载体的构建及其对结肠癌细胞增殖的影响 中文摘要 中文摘要 目的 结肠癌的发生与结肠慢性炎症密切相关。TIPE2(Tumor necrosis factor- α-induced protein 8-like 2)是一种炎症和免疫平衡的调节因子。本实验旨在构建表 达 TIPE2 的腺病毒载体，并初步观察其对结肠癌细胞增殖的影响。 方法 HEK293 细胞中 Trizol 法提取 RNA、逆转录、Primer star 程序扩增出目 的片段 TIPE2-cDNA 后，将 TIPE2-cDNA 定向克隆至转移质粒 pShuttle-CMV 多克 隆位点，然后与病毒骨架质粒 pAdc68 重组，在 HEK293 细胞中包装成完整病毒并 复制扩增、纯化，获得表达 TIPE2 的重组腺病毒载体，命名为 Adc68-TIPE2。实 时荧光定量 PCR 及 Western blot 检测病毒感染后 TIPE2 在结肠癌细胞系 HT29 及 SW620 中的表达，MTT 法检测 TIPE2 对结肠癌细胞增殖的影响。 结果 重组腺病毒载体 Adc68-TIPE2 构建成功。病毒感染后 TIPE2 可在结肠 癌细胞系 HT29 及 SW620 中高效表达。以不同浓度 Adc68-TIPE2（分别为 108vp/ml,109vp/ml,1010vp/ml）感染 HT29 及 SW620 细胞 48 小时后，HT29 细胞的 增值率分别为 93%，71%，14%,与空载体相比病毒浓度为 109vp/ml、1010vp/ml 差 异有统计学意义（P0.05),病毒浓度为 108vp/ml差异无统计学意义（P0.05）；SW620 增殖率分别为 89%，53%，10%,与空载体相比病毒浓度为 108vp/ml,109vp/ml 差异 有统计学意义（P0.05）,病毒浓度为 1010vp/ml 差异无统计学意义（P0.05）。 结论 本研究成功构建表达 TIPE2 的腺病毒载体 Adc68-TIPE2，Adc68-TIPE2 可抑制结肠癌细胞增殖，为后续研究其抗肿瘤机制奠定基础。 关键词 TIPE2 腺病毒载体 结肠癌 作 者：慈雪萍 指导老师：常树建 I 英文摘要 表达 TIPE2 腺病毒载体的构建及其对结肠癌细胞增殖的影响 The Construction of Adenovirus Expressing TIPE2 and the Effect of TIPE2 on the Proliferation of Colon Cancer Cells Abstract Objective The occurrence of colon cancer is closely associated with colon chronic inflammation.TIPE2(tumor necrosis factor-α-induced protein 8-like 2) is a newly identified