08第8章 分子发光分析法.ppt

第8章 分子发光分析法;8.1 概论;8.1.2 分子发光分析法的特点 灵敏度高。较吸收光度法一般要高2 ~ 3个数量级。 选择性比较高。物质对光的吸收具有普遍性，但吸光后并非都有发光现象。即便都有发光现象，但在吸收波长和发射波长方面不尽相同，这样就有可能通过调节激发波长和发射波长来达到选择性测定的目的。 样品量小，操作简便，工作曲线的动态线性范围宽。 发光检测的高灵敏度，以及发光光谱、发光强度、发光寿命等各种发光特性对所研究体系的局部环境因素的敏感性，因此，发光分析法在光学分子传感器以及在生物医学、药学和环境科学等方面的应用更显示了它的优越性。 ;8.2 分子荧光与磷光光谱分析法;8.2.1 基本原理 1. 分子能级与跃迁 分子能级比原子能级复杂； 在每个电子能级上，都存在振动、转动能级； 基态(S0)→激发态(S1、S2、激发态振动能级)??吸收特定频率的辐射；量子化；跃迁一次到位； 激发态→基态：多种途径和方式(见能级图)；速度最快、激发态寿命最短的途径占优势； 第一、第二、…电子激发单重态 S1 、S2… ； 第一、第二、…电子激发三重态 T1 、 T2 … ；;2.电子激发态的多重度;3.激发态→基态的能量传递途径;S2;非辐射能量传递过程;辐射能量传递过程;荧光、磷光的寿命和量子产率;8.2.1.2 荧光、磷光与分子结构的关系 1.分子产生荧光必须具备的条件 （1）具有合适的结构； （2）具有一定的荧光量子产率。 荧光量子产率（?）：;2.化合物的结构与荧光;8.2.1.3 影响分子发光的环境因素 1.溶剂的影响 除一般溶剂效应外，溶剂的极性、氢键、配位键的形成都将使化合物的荧光发生变化； 2.温度的影响 荧光强度对温度变化敏感，温度增加，外转换去活的几率增加。 3. 溶液pH 对酸碱化合物，溶液pH的影响较大，需要严格控制；;8.2.1.4 荧光、磷光的猝灭 1.猝灭 发光分子与溶剂或溶质分子之间所发生的导致发光强度下降的物理或化学作用过程。 与发光分子相互作用而引起发光强度下降的物质，称为猝灭剂。 2.动态猝灭与静态猝灭 猝灭剂与发光物质的激发态分子之间的相互作用引起动态猝灭；猝灭剂与发光物质的基态分子之间的相互作用引起静态猝灭。 ;8.2.1.5 激发光谱和发射光谱 荧光(磷光)：光致发光，照射光波长如何选择？ 1.荧光(磷光)的激发光谱曲线 固定测量波长(选最大发射波长),化合物发射的荧光(磷光)强度与照射光波长的关系曲线 （图中曲线I ） 。;2.荧光光谱(或磷光光谱);3.激发光谱与发射光谱的关系;镜像规则的解释;200;8.2.1.6 荧光(磷光)强度与溶液浓度的关系; 随着溶液浓度的进一步增大，将会出现发光强度不仅不随溶液浓度线性增大、甚至出现随浓度的增大而下降的浓度效应。;8.2.2 荧光、磷光分析仪器;仪器光路图;仪器框图;8.2.2.2 磷光分析仪器;8.2.3 荧光的常规测定方法;8.2.4 磷光测定的方法;8.2.4 磷光测定的方法;8.2.5 荧光、磷光分析法的应用;8.3 化学发光分析法;8.3.2 基本原理 在化学反应过程中，某些化合物接受能量而被激发，从激发态返回基态时，发射出一定波长的光。 A +B = C + D* D* → D + h? （1）能够发光的化合物大多为有机化合物，芳香族化合物； （2）化学发光反应多为氧化还原反应，激发能与反应能相当 ?E=170～300 kJ/mol；位于可见光区； （3）发光持续时间较长，反应持续进行； 化学发光反应存在于生物体(萤火虫、海洋发光生物)中，称生物发光(bioluminescence)。;化学发光效率;3.化学发光强度与化学发光分析的依据;8.3.3 化学发光反应的类型; O3 → O2 + O （1000 ?C石英管中进行） NO + O → NO2* NO2 * → NO2 + h? 发射光谱范围：400～1400nm；灵敏度1ng/cm-3； 氧原子与CO的发光反应： CO + O → CO2* CO2 * → CO2 + h? 发射光谱范围：300～500nm；灵敏度1ng/cm-3； ;c. 乙烯与O3的发光反应;d.火焰中的化学发光反应;b.硫化物;8.3