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杀虫剂离体(in vitro)筛选方法研究进展;;传统的农药筛选方法;; ; MTT（溴化-[3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基]四氮唑）法是二十世纪八十年代发展起来的一种快速、简便的体外抗癌药物敏感性的测试方法。目前已被广泛用于杀虫剂离体筛选实验。其作用的基本原理如下：活细胞线粒体中的琥玻酸脱氢酶能够还原黄色的溴化MTT为蓝紫色的不溶于水的甲臜（formazan），甲臜的生成量在通常情况下与活细胞数成正比。由于甲臜的生成量可通过酶标仪测定其在570nm处的吸收度（OD值）而测定，因此可根据OD值推测出活细胞的比例，测定化合物的杀虫活性。;3. 同位素示踪技术在杀虫剂离体中的应用; 配体与受体作用在作用于GABAA受体的杀虫剂筛选中常用的探针有[3H]EBOB（1-(4’-乙炔基苯基)-4-正丙基-2,6,7-三氧杂双环[2.2.2]辛烷），[3H]Ivermectin B1a,，[35S]TBPB（4-叔丁基-双环硫化磷酸酯），作用于烟碱乙酰胆碱受体的[3H]IMI（1-（6-氯-3-吡啶甲基）-N-硝基-咪唑烷-2-亚胺），作用于鱼尼汀受体的[3H] Ryanodine等。;[3H]EBOB;操作程序如下：;亲和性测定实验过程;;化合物 （15） ;化合物活体与离体的活性相关性;IC50housefly = 0.455 nM IC50rat 10000 nM;1.电生理技术在杀虫剂离体筛选中的应用 2.荧光检测技术在杀虫剂离体筛选中的应用 3.其它基于不同受体的离体筛选方法 ;电生理技术在杀虫剂离体筛选中的应用;青蛙卵母细胞GABA受体电生理测定过程 ;化合物4f 抑制GABA受体膜片嵌电生理; GABA 对其受体的电生理作用;荧光检测技术在杀虫剂离体筛选中的应用;荧光检测技术原理; 将细胞孵育于一定的荧光指示剂和Mask dye 中，荧光指示剂附着于细胞膜外侧，并为Mask dye 所掩盖。当细胞膜上的离子通道打开或由其它原因导致细胞的去极化时，荧光指示剂移至细胞膜内侧，但Masking dye 不能进入细胞，荧光指示剂的荧光释放可以检测到荧光信号。;GABA受体拮抗剂活性荧光检测程序;; 基于ATP水平变化的受体药物筛选: 采用化学发光方法检测ATP，具有更高的敏感性，而且简便、快速，是目前最为流行的方法。该方法基于萤火虫荧光素酶（Firefly Luciferase）催化荧光素氧化，消耗ATP，发出光子的???效发光反应，具有发光效率极高、发光量与ATP含量呈很好的线性关系的优点。; 随着生命科学的迅速发展，特别是功能基因组、蛋白质组、代谢组、细胞组、组合化学、组合生物合成等新的研究领域的迅猛发展，使得潜在的药物作用靶点数目和有待筛选的化合物数目显著增多。这些进展为药物筛选提供了良好的条件，同时也对筛选的效率提出了更高的要求，不仅需要更大的筛选规模和筛选速度，同时也要求筛选模型的检测技术能够更快速、全面反映被筛样品的生物活性。;武汉工程大学在农药研发方面的工作;仿制品种;谢谢大家！