维A酸对慢性阻塞性肺疾病基质金属蛋白酶影响.docVIP

摘要】 　　目的 利用维Ａ酸对实验性大鼠慢性阻塞性肺疾病的干预，检测其基质金属蛋白酶(MMP)的变化。方法 Wistar雄性大鼠36只，随机分为正常对照组、模型组和用药组，每组12只。将模型组大鼠放入染毒箱内，每天被动吸烟2次，每次16支(30 min)，2次间隔4 h，连续75 d；用药组每天被动吸烟染毒前通过胃管给大鼠灌胃维A酸15 mg/kg，共75 d；对照组气管内滴入等量的生理盐水25 d后处死大鼠。模型组大鼠用药后观察各组大鼠肺组织的病理改变，免疫组化方法及酶联免疫试验观察肺组织基质金属蛋白酶表达情况。结果 模型组MMP2 和MMP9 的活性分别为(1.03±0.21) ng/ml、(0.984±0.182) ng/ ml,其表达与正常对照组〔(0.49±0.15)ng/ml、(0.415±0.084) ng/ml〕比较差异有显著性(P＜0.01)；用药组MMP2 和MMP9 的活性〔(0.91±0.19) ng/ml、(0.670±0.012) ng/ml〕和表达与模型组比较差异有显著性(P＜0.01)。结论 维A酸对慢性阻塞性肺疾病防治及治疗有很好的作用。 【关键词】 基质金属蛋白酶；慢性阻塞性肺疾病；维A酸 　　慢性阻塞性肺疾病（COPD）是由多种因素引起的疾病，既有环境因素，又有自身因素，是一种不能完全可逆的气流受限为特征的疾病，探索经济有效的防治方法是众多国内外学者关注的领域，维生素Ａ及其活性衍生物在这方面已初步显示了良好前景。目前用维生素Ａ预防COPD的研究才刚刚起步，对基质金属蛋白酶的影响研究甚少，其影响机制尚未清楚。本文利用维Ａ酸对实验性大鼠慢性阻塞性肺疾病进行干预，探讨其基质金属蛋白酶的变化。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物 　　Wistar雄性大鼠36只（购于中南大学动物部），12周龄，体重(274±29)g。随机分为正常对照组、模型组和用药组，每组12只。 　　1.2 COPD模型制备 　　将模型组的大鼠放入的有机玻璃制成的染毒箱内，在其右上角开通一个直径1 cm的通气孔。大鼠每天被动吸烟2次；每次16支(30 min)，2次间隔4 h，连续75 d。被动吸烟染毒方法：将点燃的香烟（购买的长沙卷烟厂生产的白沙牌香烟）通过三通将烟雾吸入100 ml的注射器中，关闭吸烟通路一端，再打开三通的另一端将烟雾注入染毒箱内进行大鼠被动吸烟染毒。用药组每天被动吸烟染毒前通过胃管给大鼠灌胃维A 酸15 mg/kg（上海第六制药厂生产），共75 d。正常对照组气管内滴入等量的生理盐水，25 d后处死大鼠用于实验观察。 　　1.3 基质金属蛋白酶的测定 　　实验各组于吸烟染毒结束后次日取大鼠右中叶肺组织，制成冰冻切片，同上进行MMP2和MMP9的免疫组织化学染色，阳性反应为胞浆呈棕褐色。应用MMP2和MMP9检测试剂盒以酶联免疫试验(ELISA)进行MMP2和MMP9的活性检测（用武汉博士德公司生产的ELISA方法试剂盒进行活性测定）。 　　1.4 统计学处理 　　采用SPSS10.0版统计软件进行F检验。 　　2 结果 　　2.1 病理改变 　　模型组的大鼠大体观察可见肺体积较正常对照组明显增大，颜色苍白，弹性减弱，有多少不等的肺泡融合形成大疱。光镜下观察可见肺泡管、肺泡囊和肺泡明显扩张，肺泡壁变薄，并有不同程度的断裂。用药组大鼠的支气管黏膜上皮脱落较模型组明显减轻,炎性细胞浸润以及肺泡壁断裂和肺泡腔扩大情况亦较模型组减轻，较对照组重。 　　2.2 肺组织MMP2和MMP9的的免疫组化结果 　　见表1。模型组与对照组大鼠比较,支气管、肺组织中MMP2和MMP9的相对含量显著增加。模型组与用药组比较含量明显减少(P＜0.01)。表1 MMP2 和MMP9 蛋白相对含量(略) 　　2.3 支气管肺泡灌洗液中MMP2和MMP9的活性测定 　　模型组与对照组比较,用药组与模型组比较,差异均有显著性(P＜0.01）（表2)。表2 各组大鼠支气管肺泡灌洗液中MMP2和MMP9活性比较(略) 　　3 讨论 COPD是一种不能完全可逆的气流受限为特征的疾病，气流受限进行性发展，多与肺部对有害颗粒与气体的异常炎症反应有关。维生素Ａ能够调节肺的形态发生和细胞分化；具有抗感染作用，不仅促进弹性蛋白酶的合成，而且阻止其降解。近年来一些研究均表明，COPD患者体内及实验性大鼠肺气肿模型中维生素A水平下降，而且其水平与气道阻塞程度呈负相关〔1，2〕。 基质金属蛋白酶参与COPD的发病机制主要是通过破坏肺泡基质成分，使肺泡腔扩大，肺泡弹性回缩能力减弱，从而导致气体滞留。另一方面，通过介导炎症细胞聚集和破坏上皮/内皮结构，参与炎症反应和