北大药学院仪器-荧光法资料.ppt

荧光分析方法的特点：灵敏度高，选择性好 UV-Vis的检出限10-7g/ml，荧光分析法的检出限10-10g/ml~10-12g/ml。;概述;第一节 基本原理;一、分子荧光 （一）分子荧光的产生;分子基态单重态中的电子对→被激发时→其中一个电子，通常跃迁至第一激发态单重态轨道上，也可能跃迁至能级更高的单重态上。 不能直接跃迁至第一激发三重态轨道上，禁阻跃迁;2. 激发态→基态的能量传递途径;S2;非辐射能量传递过程;荧光发射;磷光发射; 鉴别荧光物质 荧光测定时选择 测定波长的根据; 指不同激发波长的辐射引起物质发射某一波长荧光的相对效率。 测绘方法： 通过激发单色器扫描，使不同波长的入射光激发荧光物质 ，然后固定测定波长 (为荧光的最大发射波长) 检测相应的荧光强度（F）。 F为纵坐标，激发波长（?ex）为横坐标作图。;2.荧光光谱(或磷光光谱) （fluorescence spectrum）;荧光波长与被照射物质有关。以紫外-可见光作激发光源，所发射荧光常在可见光区;荧光光谱特征;镜像规则的解释;200;二、分子结构与荧光的关系;（一）荧光寿命和荧光效率;荧光效率;(二)分子结构与荧光的关系;1.长共轭结构共轭度越大，荧光越强，并产生红移。;2.分子的刚性和共平面性;3. 取代基;2. 溶剂：同一物质在不同溶剂中，其荧光光谱的形状和强度都有差别。一般，溶剂极性? 荧光波长? F ? 原因：极性溶剂，???*跃迁所需能量差?E小，跃迁几率?，紫外吸收波长?、荧光波长? 、F ? 溶剂粘度?，分子间碰撞↑ F ? ;3. pH值的影响;4. 荧光熄灭剂的影响;荧光熄灭形式;荧光熄灭法;5. 散射光的影响;散射光的干扰;影响荧光强度因素;第二节 荧光定量分析方法一、荧光强度与荧光物质浓度的关系;荧光强度与荧光物质浓度的关系;为什么荧光分析法比紫外-可见分光光度法灵敏度高?;二、定量分析方法;;一、仪器 滤光片荧光计；滤光片-单色器荧光计；荧光分光光度计 由激发光源、激发单色器、样品池、发射单色器、检测器及数据记录与处理系统组成。;（1）光源 氙灯 （2）样品池 荧光用的??品池须用低荧光的材料制成，通常用石英，形状以四面透光、方形和长方形为宜。 （3）单色器 荧光计：滤光片；荧光分光光度计：光栅 （4）检测器 由光电管和光电倍曾管作检测器，并与激发光成直角。;;荧光分光光度计与紫外可见分光光度计的比较;二、其他荧光分析技术;3.同步荧光分析（自学） 4.胶束增敏荧光分析（自学） 胶束溶液对荧光物质的增溶、增敏、增稳。 提高分析方法的灵敏度和稳定性