调节细胞自噬对鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的影响-张红.doc

作者信息： 第一作者：张红 E-mail: pretty_zhang@163.com 通讯作者：王建东 E-mail: wangjiandong79@ 基金项目：成都医学院基金CYZ11-007；四川省教育厅青年基金项目10ZB096 调节细胞自噬对鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的影响 张 红，刘 湧，杨淑霞，张 芹，刘 进，王建东* (成都医学院，四川成都 610083) 摘 要：以鱼藤酮处理的PC12细胞为帕金森病体外模型，分别使用雷帕霉素作为自噬途径的促进剂，巴佛洛霉素A1和3-甲基腺嘌呤作为抑制剂，检测调节细胞自噬对细胞凋亡的影响，发现巴佛洛霉素A1极大提高了细胞凋亡率，3-甲基腺嘌呤则可以减轻鱼藤酮诱导的细胞凋亡，而雷帕霉素虽然促进受损细胞凋亡，但降低了受损细胞早期的死亡率。构建pEGFP-LC3稳定转染的PC12细胞，流式细胞检测结果显示，抑制或促进细胞自噬，细胞内自噬相关蛋白LC3均有明显增加。推测部分抑制细胞自噬，可以避免细胞受损诱导的过度自噬对细胞的损伤作用，而完全阻断细胞自噬则会引起细胞死亡。 关键词：帕金森病；自噬；鱼藤酮；PC12细胞 Effects of adjusting autophagy on rotenone induced PC12 cells damage ZHANG Hong, LIU Yong, Yang Shuxia, ZHANG Qin, LIU Jin, WANG Jian-dong * ( ChengDu Medical College, ChengDu 610083, China) Abstract: To detect the effects of adjusting autophagy on rotenone induced PC12 cells apoptosis, PC12 cells treated by rotenone were used as an in vitro model of Parkinson’s disease, and, using rapamycin as the autophagy enhancer, Bafilomycin A1 and 3-MA as inhibitor of autophagy. It was found that Bafilomycin A1 greatly increased the apoptosis of cells，and 3-MA reduced the apoptosis of rotenone-induced cells, and rapamycin may contribute to impaired apoptosis, but reduce the damaged cells in early mortality. Construction PC12 cells of stably transfected pEGFP-LC3, flow cytometry results show, inhibit or promote autophagy, cell autophagy related protein LC3 were significantly increased. Hypothesized that partial inhibition of autophagy, can prevent cell damage induced by excessive autophagy, and completely blocked autophagy can cause cell death. Key words: Parkinson’s disease, autophagy, Rotenone, PC12 cells 1 前言 在细胞内，线粒体受损能够引起活性氧(Reactive oxygen speeies, ROS)的释放，造成细胞内氧化应激水平提高，并且诱导细胞死亡[1]。这一细胞死亡过程是导致帕金森病（Parkinson’s disease,PD）以及其它神经退行性疾病乃至心脏疾病发生的一个重要因素[2]。最近的研究发现自噬在线粒体受损以及氧化应激诱导的细胞死亡过程中发挥了重要作用[3]。 自噬（Autophagy）是细胞内一种依赖溶酶体的物质降解途径，目前发现其降解对象囊括了从可溶蛋白到完整细胞器在内的所有胞内物质。在细胞受到外界环境刺激时，如饥饿、氧化应激等，均可以激活细胞自噬途径，降解细胞内冗余或受损组分，因此自噬对细胞具有一定的保护作用。但同时也有研究发现，过度活化的细胞自噬也可以导致细胞自噬性死亡，这是一种不同于凋亡的程序性死亡方式，也称为Ⅱ型程序性细胞死亡[4]。那么