细胞工程考试复习重点.doc

绪论 生物技术：生物技术是以生物科学为基础，利用生物个体或生物器官、组织、细胞的特性和功能，设计构建具有预期性状的新物种或新品系（包括细胞系），以及与工程原理相结合进行产品加工生产的综合性技术体系。 细胞工程：应用细胞生物学和分子生物学方法，借助工程学的试验方法或技术，在细胞水平上研究改造生物遗传特性和生物学特性，以获得特定的细胞、细胞产品或新生物体的有关理论和技术方法的学科。 生物技术的主要范畴：基因工程，发酵工程，生化工程，蛋白质工程，酶工程，细胞工程 ：实验室设置及一般技术 培养基的组成和配制：组成：无机盐（不同植物生长发育所需无机盐在数量上可能存在一定的差异，但从无机盐的类型上看，所有植物是一致的。一种类型的离子可以由一种以上的无机盐提供。避免由单一化合物提供某一营养元素时，在培养中因培养物对不同离子的吸收差异而产生的培养基pH的剧烈变化。），有机化合物（糖类：C源，维持培养基渗透压。植物组培常用蔗糖。维生素：参与酶的形成，与植物蛋白、脂肪代谢相关。 肌醇：本身不促进生长，但它在糖类的相互转化、维生素、激素的利用等方面具有重要的促进作用。腺嘌呤：合成细胞分裂素的前体之一，外源添加腺嘌呤有利于细胞协调自身合成细胞分裂素，有利于细胞的分裂和分化，促进芽的形成和生长。氨基酸：蛋白质的组成成分。），生长调节物质(生长素类:生理作用：促进细胞分裂和生长，有利于细胞脱分化并启动细胞分裂，有利于形成愈伤组织。在离体培养的分化调节中，生长素促进不定根的形成而抑制不定芽的发生。常用生长素：有IAA(吲哆乙酸)、NAA (奈乙酸 )、2,4-D(二氯苯氧乙酸)和IBA(吲哆丁酸)等。使用2,4-D时，须严格控制使用浓度和培养时期，高浓度的2,4-D常常抑制器官的发生。细胞分裂素类:作用：促进细胞分裂，调节器官分化，延迟组织衰老，增强蛋白质合成等。离体培养中，细胞分裂素能促进不定芽的发生。 常用细胞分裂素：KT (激动素)、BA(6-卞基腺嘌呤)、2-ip(异戊烯氨基嘌呤)玉米素等。近年来TDZ（苯基噻二唑基脲）亦作为一种新的细胞分裂素在许多离体培养研究中使用。赤霉素类:作用：促进细胞的伸长生长，与生长素协调作用对形成层的分化具有一定影响，同时还能刺激体细胞胚进一步发育成植株。在某些情况下，赤霉素对于生长素和细胞分裂素具有一定的增效作用。 大多数情况下，培养物本身的内源赤霉素已能满足其生长发育的需求，只在特殊情况下须添加，且需严格控制浓度.)，水(离体培养中，水既是培养基营养成分的溶剂，又是培养基的重要组成部分。不同试验要求使用不同级别的水。存放水的容器应注意！)，其它附加成分(琼脂：非培养基的必须成分，根据培养类型确定是否要求添加。浓度高，硬，影响营养物质的吸收；浓度低，凝固性差，起不到支撑作用。活性炭：吸附剂，可吸附培养过程中产生的一些有毒物质。选择性差，受温度影响) 配制：先配成母液，使用时按比例稀释。按顺序添加。 实验室的基本要求：实验准备（培养基配制、器皿洗涤、培养基和器皿灭菌等），无菌操作，控制培养 基本技术：洗涤 灭菌 培养基组成及配置 外植体处理 实验室灭菌方法：物理方法：干热、湿热、射线处理、过滤等。化学方法：消毒剂、抗菌素灭菌。培养基灭菌：高压蒸汽灭菌或过滤灭菌（严格控制培养基的灭菌时间和温度）。湿热灭菌：灭菌后及时干燥，以免再次污染，101.3KPa，121℃，25-30min 干热灭菌：160-180℃，40min 120℃，2h 培养条件的控制：光照调节（强度、时间和光质，光照调节是分阶段进行的： 外植体培养初期和愈伤组织增殖阶段，黑暗或弱光。器官分化阶段，高强度光照。 光质研究报道较少。蓝光诱导烟草愈伤组织成苗，红光则不能成苗。 ），温度调节（适温有利于细胞分裂，而在一定范围内降低培养温度则使细胞的质量增加），pH调节（通常使用的pH值范围是5.5-6.5 pH变化的原因：外植体对各种成分吸收的差异 代谢产物的释放 高温灭菌），气体调节（培养室的透气程度和培养容器的封闭程度影响气体交换，影响培养物的生长状态。 培养器皿的密闭性：捆扎松紧度和材料透气性。固体培养，组织完全浸入培养基，停止生长。液体培养，振荡培养可改善通气条件。小规模培养，培养室的透气程度影响不大；批量化大规模生产，应考虑空气交换。 ） 第三章： 细胞全能性与形态发生 细胞全能性：是指一个细胞所具有的产生完整生物个体的固有能力。 细胞全能性的相对性：1不是所有基因型的所有细胞在任何条件下都具有良好的培养反应。2即使对于植物细胞而言，细胞全能性也并不意味着任何细胞均可以直接产生植物个体。3动、植物细胞全能性的表现程度存在明显的差异。 植物细胞按照分裂能力分为三类：胚性细胞——植物干细胞。如茎尖、根尖及形成层细胞。永久失去分