细胞生物学40课件2.ppt

第二章 细胞生物学研究方法;第一节 细胞形态结构的观察方法;;B 暗视野显微镜;; C 相差显微镜（PCM） 1953年获得诺贝尔物理奖，相差显微镜的基本原理是，把透过标本的可见光（直射光和衍射光）的光程差变成振幅差，从而提高了各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。 应用：观察未经染色的标本和活细胞。;在相差显微镜下观察的分裂期细胞变化过程 ; D 倒置显微镜 组成和普通显微镜一样，只不过物镜与照明系统颠倒，前者在载物台之下，后者在载物台之上，用于观察培养的活细胞，具有相差物镜。; E 荧光显微镜 细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。 ;;; F 微分干涉差显微镜（DIC显微镜） 能显示细胞结构的三维立体投影影像，立体感强，用于研究活细胞中较大的细胞器，与录像设备结合，可观察活细胞中的颗粒及细胞器的运动。 ;;;;;;; 例：胞内钙离子浓度的监测 钙是通用的第三信使，能特异地选择性地调节细胞的活动，因此测定细胞中钙离子浓度在空间和时间上的变化，对于监控许多细胞的生理活动有重要作用。如受精时，卵细胞突然定位地将钙离子释放到胞浆中。 钙指示剂：FuRA－2，水母发光蛋白等 ;;;二、电镜技术;;;;;;;;第二节 细胞组分的分析方法;;;;;;;;四、细胞内特异核酸的定位与定性;;五、放射自显影技术;;六、定量细胞化学分析技术;;※ 细胞分选 荧光标记抗体探针＋细胞抗原 细胞被标记 除去游离抗体 稀释 超声波振荡器内与鞘液混合 液滴被激 普通细胞：干涉检测器检测 光激发 荧光标记：干涉检测器＋ 细胞荧光检测器检测 鞘液带上正电荷 负极收集器 鞘液带上负电荷 正极收集器 ※染色体分选 同理。用荧光标记的DNA探针同特异染色体结合，使待分选的染色体带上荧光标记。 ;;第三节 细胞培养、细胞工程??显微操作技术;;;;;;第四节 用于细胞生物学研究的模式生物;;讨论、思考题、作业： 1、课后查阅相关文献。 2、预习下章、节内容 3、思考： 1）比较不同类型显微镜的结构特点和应用特性。 2）如何测定蛋白质、核酸、多糖和脂类等物质在细胞中的分布和含量？