第三章细胞工程教程方案.pptx

第 3 章;;1 动物细胞培养;;原代培养 （primary culture）：即细胞或组织离开机体后的首次培养。 primary culture - started from cells, tissues or organs taken directly from an animal 传代（passage） ： 培养的细胞生长到一定的密度后转移到新的容器中培养或需要更换到新的培养液称为传代或传代培养。 subculture - the transplantation of cells from one culture to another (passaging) 细胞系（cell line）：原代培养物经首次传代成功后即成细胞系，由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成。如果不能继续传代或传代数有限，可称为有限细胞系。如果可以连续传代则称为连续细胞株。原代培养细胞成功传代即为细胞系。 cell line - arises from the primary culture at the time of the first subculture - finite life span continuous cell line - a cell line which has been transformed - infinite life span 细胞株（cell strain）：从培养细胞中筛选出的具有特定性质或标志的细胞群。 克隆（clone）：亦称无性系。指由同一个祖先细胞通过有丝分裂产生的遗传性状一致的细胞群。;2 发展历史;实验室中常用的几种细胞系;3.1.1 动物细胞的特点 与微生物、植物细胞相比，动物细胞有哪些特殊之处？ ;动物细胞与微生物细胞相比，主要有以下不同：;3.1.2 体外培养;Primary Culture;3.2.1 体外培养的条件;对于培养环境的适应性更差，对环境极其敏感，包括 pH 、溶解氧、温度、剪切力等都比微生物有更高的要求，一般需严格监控。 动物细胞生长缓慢，因此培养时间较长。 对环境的影响又比微生物为大，因此常用空气、氧、二氧化碳和氮的混合气体进行供氧和调节pH。 ;培养条件;天然培养基;合成培养基;无血清培养基; 培养过程图解;细胞系生长过程的3个主要阶段 ;（二）传代期 原代培养细胞一经传代后便称为细胞系，在全生命期中该阶段的持续时间最长。一般情况下，当传代10-50次后，细胞增殖逐渐缓慢，以致完全停止。 ;（三）衰退期 该阶段细胞仍然生存，但是增殖很慢或不增殖。细胞形态轮廓增强，最后开始衰退凋亡。 ;22; 单克隆抗体制备过程;思考：;单克隆抗体的应用;动物组织细胞培养要求;二 培养工具:;　根据培养细胞种类要求不同培养瓶的形态各异，用于细胞传代培养的细胞要求瓶壁厚簿均匀，便于细胞贴壁生长和观察，瓶口要大小一致，口径一般不小于1cm，允许吸管伸入瓶内任何部位。 　　  ;三、培养条件细胞在体外培养中所需的条件与体内细胞基本相同。;1）恒定的温度:37 ℃，;2）PH：7.2-7.４;3) 气体：;4）营养—培养基：;合成培养基;天然培养基;常用的动物血清主要有牛血清和马血清。牛血清分为胎牛血清和犊牛血清，前者来源少，价格高；后者要求刚产下尚未哺乳的小牛，因为哺乳后的小牛血清中可能含有更复杂的成分。血清中已知的成分主要有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等。蛋白质主要是白蛋白和球蛋白。;氨基酸是细胞合成蛋白质的基本成分，氨基酸中有12种是细胞本身不合成的，必须由培养液提供。激素有胰岛素、生长激素和多种生长因子如表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、增殖刺激因子(MSA)、类胰岛素生长因子(IGFl、IGF2)等。 水解乳蛋白、胶原是另外两种较好的天然培养基成分。水解乳蛋白是乳白蛋白的水解产物，呈蛋黄色粉末状，富含氨基酸。一般配制成0．5％溶液，微酸性。胶原是从动物真皮中提取的，具改善细胞表面特性促使其附着生长的作用。;无血清培养基;5) 细胞培养溶液;抗生素溶液： 1)青、链霉素:每毫升培养液含100U青霉素和100ug链霉素. 2)卡那霉素：终浓度为50ug/ml培养液。 3）制霉菌素：浓度25U/ml，小瓶分装，每瓶一次用完。 ;6)、无污染环境;3.1.3 动物细胞（组织）培养的生长特性 ;1 粘附型细胞 anchorage－dependent ;体外培养细胞类型（形态）; 2 非粘附型细胞（悬浮型细胞）;悬浮培养类似微生物的深层培养。由于是悬浮生长，细胞密度一般都较高，培养的效率也高、操作也容易。 这种方法有多方面的优越性，易于大规模生产，便于过程的控制。 可惜能在悬浮状态下生长的细胞种类有限，且不太方便观察。 ;二 动