新植物遗传转化资料.pptx

第十七章：植物遗传转化;植物遗传转化 （plan genetic transformation): 应用重组DNA技术、细胞组织培养 技术或种质系统转化技术，有目的地将外源基因或DNA片段插入到受体植物基因组中并通过减数分裂获得新植株的技术。 ;第一类：外源裸露基因的直接导入法；通过物理或化学的方法直接将外源目的基因导入植物基因组中。基因枪转化法 第二类：载体介导的转化方法；通过将目的基因连接在植物表达载体上，随着载体DNA的转移而将外源目的基因整合到植物基因组中。农杆菌介导转化法,病毒介导的转化法 第三类：种质转化系统法；包括植物原位真空渗入法和花粉管通道法。;（一）基因枪法;（1）原理：基因枪法把遗传物质或其他物质附着于高速微弹直接射入细胞、组织和细胞器。气体基因枪可在广泛的细胞型中得到瞬时的、稳定的和高效率的转化作用。气体基因枪有一个产生冲击波的特殊结构，在恰当的气压范围内从3.5MPa-10MPa，具有相应不同的可破裂膜，将包覆DNA的粒子穿越，射入在轰击室底部的靶细胞中。;（2）程序与方法： ①轰击微弹的制备② 基因枪轰击参数 ③受体材料 ④ 轰击样品 ;（3）基因枪法优缺点 基因枪法优点：①无宿主限制 ②受体类型广泛 ③质粒构造简单 基因枪法缺点： ①仪器设备，轰击微弹的制备等较为昂贵 ②整合的外源基因拷贝数不易控制 ③轰击对细胞损伤大等;（二）农杆菌介导法; （2）方法：人们将目的基因插入到经过改造的T—DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出转基因植株。农杆菌介导法起初只被用于双子叶植物中，近年来，农杆菌介导转化在一些单子叶植物(尤其是水稻)中也得到了广泛应用。 ;（3）转化步骤可简单概括为以下方面： 1、获取目的基因。用限制酶切割下目的基因。 2、基因表达载体的构建。将目的基因与载体（大多数选用质粒）用DNA连接酶连接起来。 3、将目的基因导入受体细胞。将含目的基因的重组质粒导入农杆菌（农杆菌为受体细胞）。 4、目的基因的检测与鉴定。用DNA分子杂交技术/分子杂交技术/抗原-抗体杂交/个体生物学水平鉴定（这个方法需要导入重组后的细胞的植物体，详见第五步） 几种方法进行检验（根据要求选取不同方法）。 5、最后将成功表达的细胞导入植物体内，对植物体进行个体生物学水平鉴定。 ;农杆菌介导的过程;（4）优缺点 农杆菌介导法优点：①转化频率较高。 ②转移的外源片段较大。 ③整合的外源基因多为单拷贝。 ④整合到植物基因组的外源基因可以定向表达。 农杆菌介导法缺点：①受体植物基因型限制。 ②农杆菌是一个生物有机体，转化受植物材料的影响大。;（三）其他常用的转换方法;Section 2: 转化植株的检测;;Section 3: 几种植株遗传转化的技术;② 棉花的遗传转化技术 农杆菌介导法 花粉管通道法 基因枪法 ;农杆菌介导法转化棉花;（二）园艺植物遗传转化技术 ①黄瓜遗传转化 ;黄瓜遗传转化的方法与结果 发根农杆菌介导 根瘤农杆菌介导 花粉管通道 floral dip法 ;②花椰菜遗传转化 十字花科，具有良好的再生能力。;花椰菜遗传转化方法如图： 发根农杆菌介导 根瘤农杆菌介导 ;（三）林木遗传转化的技术 目前以掌握了杨树、白桦、桉树、落叶松、核桃、苹果、沙田柚等树种外源基因转化技术。主要转化方式是农杆菌介导法。增强植物抗病、耐高温、耐旱等方面。 （四）药用植物遗传转化的技术