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紫外—可见吸收光谱;跨越众多领域，提供完美技术;紫外-可见分光光度法原理 (Ultraviolet and Visible Spectrophotometry, UV-Vis) ? 2.1 紫外-可见吸收光谱 2.2 吸收光谱的测量-----Lambert-Beer 定律 2.3 分析条件选择 2.4 UV-Vis分光光度法的应用 UV-Vis方法是分子光谱方法，它利用分子对外来辐射的吸收特性。 UV-Vis涉及分子外层电子的能级跃迁；光谱区在160~780nm. UV-Vis主要用于分子的定量分析，但紫外光谱(UV)为四大波谱之一，是鉴定 许多化合物，尤其是有机化合物的重要定性工具之一。 ;电磁波谱;引起 UV/VIS 吸收的原因;2.1 紫外-可见吸收光谱 一、分子吸收光谱的形成 1. 过程：分子外层电子--------吸收外来辐射------产生电子能级跃迁-----分子吸收谱。 ;有机分子包括: 成键轨道 ?、 ? ；反键轨道 ?*、?* ；非键轨道 n； 可能的跃迁类型：?-?*；?-?*；?-?*；n-?*；?-?*；n-?*;σ-σ*跃迁，能量很高。电子以单键存在，如饱和碳氢 化合物，一般在波长220nm 时无强的紫外吸收； n -σ*跃迁，能量相对较高。化合物中含有非键合的O， N，S，或X- 的电子。在紫外区有强吸收； π-π*跃迁、 n -π*跃迁，能量较低。含有双键，螯合双键 芳香烃，闭环芳香烃及杂环芳香烃的化合物。 紫外和可见区有中等至强的吸收。 只有?-?*和n-?*两种跃迁的能量小，相应波长出现在近紫外区甚至可见光区，且对光的吸收强烈，是我们研究的重点。 ;?-胡罗卜素;2.2 吸收光谱的测量-----Lambert-Beer 定律 一、透射率?;二、Lambert-Beer 定律 当入射光波长一定时，待测溶液的吸光度A与其浓度和液层厚度成正比，即 k 为比例系数，与溶液性质、温度和入射波长有关。 ? 当浓度以 g/L 表示时，称 k 为吸光系数，以 a 表示，即 ? 当浓度以mol/L表示时，称 k 为摩尔吸光系数，以? 表示，即 ? 比 a 更常用。? 越大，表示方法的灵敏度越高。? 与波长有关，因此，? 常以??表示。 ;三、偏离 L-B 定律的因素 样品吸光度 A 与光程 b 总是成正比。但当 b 一定时，A 与 c 并不总是成正比，即偏离 L-B 定律！这种偏离由样品性质和仪器决定。 1. 样品性质影响 a）待测物高浓度--吸收质点间隔变小—质点间相互作用—对特定辐射 的吸收能力发生变化---? 变化； b）试液中各组份的相互作用，如缔合、离解、光化反应、异构化、配 体数目改变等，会引起待测组份吸收曲线的变化； c）溶剂的影响：对待测物生色团吸收峰强度及位置产生影响； d）胶体、乳状液或悬浮液对光的散射损失。 ;浓度影响;化学反应影响;杂散光影响;pH 值的影响;2.3 分析条件选择 一、仪器测量条件 当分析高浓度的样品时，误差更大。 由L-B定律： 微分后得： 将上两式相比，并将 dT 和 dc 分别换为?T 和 ?c，得 当相对误差 ?c/c 最小时，求得T=0.368 或 A=0.434。即当A=0.434 时，吸光度读数误差最小！ 通常可通过调节溶液浓度或改变光程b来控制A的读数在0.15~1.00范围内。 ;二、反应条件选择 显色剂的选择原则： 使配合物吸收系数 ? 最大、选择性好、组成恒定、配合物稳定、显色剂吸收波长与配合物吸收波长相差大等。 2. 显色剂用量： 配位数与显色剂用量有关；在形成逐级配合物，其用量更要严格控制。 3. 溶液酸度：配位数和水解等与 pH 有关。 4. 显色时间、温度、放置时间等。;三、参比液选择 溶剂参比：试样组成简单、共存组份少（基体干扰少）、显色剂不吸收时，直接采用溶剂（多为蒸馏水）为参比； 2. 试剂参比：当显色剂或其它试剂在测定波长处有吸收时，采用试剂作参比（不加待测物）； 3. 试样参比：如试样基体在测定波长处有吸收，但不与显色剂反应时，可以试样作参比（不能加显色剂）。;四、干扰消除 1. 控制酸度： 配合物稳定性与pH有关，可以通过控制酸度提高反应选择性，副反应减少，而主反应进行完全。如在0.5MH2SO4介质中，双硫腙与Hg2+生成稳定有色配合物，而与Pb2+、Cu2+、Ni2+、Cd2+等离子生成的有色物不稳定。 2. 选择掩