新长期施肥田间试验的土壤粒级中微生物的群体结构资料.doc

高级农业生态学作业 《Microbial Population Structures in Soil Particle Size Fractions of a Long-Term Fertilizer Field Experiment》ANGELA SESSITSCH et al. 《长期田间施肥试验的土壤粒级中微生物的群体结构》 的阅读研究报告 报 告 人：于小彬 学 号：2013202009 专 业：作物栽培学与耕作学 任课教师：李立军 日 期：2014年3月31日  科学问题 有机质种类和/或颗粒大小是否控制着土壤不同颗粒中特定微生物群体的分布。 假设 H1:有机质种类单独起作用; H2:颗粒粒级单独起作用; H3:两者联合交互起作用; H0:两者均无效。 试验设计 表土样品（0-20cm）取自1998年秋季Ultuna的长期施肥实验地。 整个实验开始于1956年，实验进行了14种处理，其中每一种处用随 机区组设计重复4次。 本实验中，只分析七个处理的样品。 持续的完全休闲耕作；无氮，地块不施氮肥； Ca(NO3)2每年每公顷80Kg的氮；GM，绿肥；AM，充分腐熟的动物肥料；泥炭； SS，下水道污泥 有机修复物在施用前进行分析，并且将等量有机质（Ca(NO3)22000Kg/ha/year)于1956，1960,1963年添加进去，这以后每隔两年手工添加一次。而且，每年春天以过磷酸盐的形式施入20KgP 每公顷，以氯化钾的形式施入35至38kg K每公顷。麦类，油菜，作物，饲料用甜菜交替种植。 结果 1、T-RFLP 分析 1、在所有的处理中，沙粒中的细菌多样性最低，粘粒中的最高。唯一例外的是泥炭作有机修复物的处理，其T-RFs数最高出现在粉粒中（表1）。涉及绿肥（GM）和腐熟动物肥(AM)的处理表现出更高的细菌多样性，特别是粘粒中，相比于其他有机修复物。另外，GM中的沙粒表现出异常高的多样性，相比于其他处理中的沙粒。在几绿肥出处理的几个处理中，一些片段表现出远远更大的荧光信号。 2、只有197bp（GM）,253bp(GM,AM),290bp(GM,AM,SS)三个T-RFs只在沙粒中发现。检测的大多数沙粒中的T-RFs也同样出现在粉粒和粘粒中（表2）。一大部分（T-RFs）在粉粒和粘粒中发现，但没有出现在沙粒中。细菌中大小为76bp和311bp（均是休闲耕作，Fallow）的T-RFs至存在于（定殖于）粉粒中，很多T-RFs只发现于粘粒中。 3、沙粒中检测的多数T-RFs表现出集中的荧光信号，片段大小组成有：39,60,62,66,81,194,197,205,208,212,223,228,231,253,290,294,297,304，以及379bp(表2，图1)。 2、序列分析及遗传进化分析排布 1、24h测序表现出与RDP数据库记录条目高相似性，其中30个序列表现出与NCBI数据库中存储的已知序列有至少95%的相似性（表3）。剩余的序列与已知的16S RNA基因，未描述的细菌分类成员以及有描述的分支很远的成员只有中等（90-94%）相关性。 这个进化树知识建立在部分测序，它展示的属于Holophaga/Acidobacterium簇类细菌的大量多样性，而不是确定的遗传进化关系如图3中展示。 2、所有测序的克隆菌的理论HaeIII-HhaI T-RFs 在T-RFLP分布图中可以看到。理论的T-RF132bp是唯一的例外，没有在T-RFLP 分析中检测到。几个序列表现出相似的T-RFLP大小（表4）。实验发现遗传进化和土壤中空间的位置的关系。一些细菌组，如Holophaga（全噬菌属 ）/Acidobacterium（乳酸杆菌属）簇类，大多数Prosthecobacter（突柄杆菌属 ）成员，是更小颗粒中主要的存在菌，而Proteobacteria（变形菌门）在各种颗粒中分布大致相当。 讨论 1、细菌与土壤颗粒级的联系 更细小的颗粒为微生物提供一个阻挡捕食者的保护性的微生境可能，更小颗粒中的提供的高大量可利用的营养可能是更高细菌多样性的原因 2、粒级中细菌对有机修复物的响应 我们的微生物群体分析的结果反映了在有机碳Corg轮转的报道中的内容。通常情况，GM和AM处理中土壤的丰富度最高，在无或非有机肥的土壤中最低，并且与施入肥料的利用率相一致。修复物中的SS，泥炭作为肥料导致了相当独特的细菌群体结构，这归因于不同的组成而不是增加或者降低多样性。两个实验表现出非常低的PH值（5.8），这可能是有一些群落的改变造成的。泥炭和SS处理没有一些其他处理中检测到的一些T-RFs 。 它们包括Holophaga/Acidobac