糖蛋白和糖肽的化学合成.pptVIP

糖蛋白和糖肽的化学合成 ;Biosynthesis of N-glycoproteins;Step 1.1Production of GlcNAc-P-P-Dolichol;GlcNAc;Step 1.3 Biosynthesis of the N-Glycan Precursor on Lumenal Leaflet of ER;GlcNAc;GlcNAc;GlcNAc;GlcNAc;a-N-glycosidic asparagine;a-O-glycosidic serine;Lai-Xi Wang的化学生物学合成方法;Lai-Xi Wang的化学生物学合成方法;Lai-Xi Wang的化学生物学合成方法;寡糖结构分析;概述;寡糖结构的要素: 各个单糖的化学结构（什么糖，吡喃还是呋喃） 糖苷键的链接顺序 糖苷键的立体构型;寡糖结构分析中常用的酶法和化学法修饰策略：;Enzymes Useful in detecting Steps in N-glycan Biosynthesis;核磁的结构分析： 核磁信息： H或者C的化学位移 氢谱： 糖环上多数的H，化学位移位于3.5-4.5之间 Fuc的6位甲基，位于1.1左右 唾液酸的3位次甲基（CH2），位于1.8-2.2之间 anomeric位置，氢原子b-H，一般位于4.5-5; a-H一般位于5-5.5之间 酰胺的甲基位于1.9左右 碳谱： 一般糖环上的碳原子一般位于60-80之间 anomeric的C,一般位于100左右， a构型的碳原子化学位移数值常小于b构型 C-H，或者H-H的耦合相关（COSY,HSQC，HMBC） HMBC可以协助判断连接顺序 HSQC可以协助判断6位C和氢原子信号 耦合常数（phase-sensitive的COSY二维谱）（二面角越小，H-H耦合越弱） 多数糖，1,2的氢原子耦合常数为1-4（alpha），或者6-10hz（beta） 半乳糖的4位，和3位以及5位的耦合常数很小很弱 NOE的空间效应（分子量接近2000左右，常使用ROSY谱图） 可以协助判断连接顺序，以及糖苷键构型;;J. Am. Chem. Soc., 2008, 130 (44), pp 14420–14421;Carbohydrate Chemistry  Glycobiology;Importance of glycoanalysis; A. Dell and H. Morris, Science291, 2001;;Carbohydrate Analysis Offers Unique Challenges;Workflow in glycoanalysis;;Glycan analysis;I. Composition analysis Glycan release for monosaccharide composition analysis;I. Composition analysisComposition analysis by (High performance anionic exchange –pulsed amperometric detection) HPAE-PAD;I. Composition analysis Composition analysis by GC-MS;I. Composition analysis Composition analysis by GC-MS;GLC Profile of Alditol Acetates(Supelco SP2330 Column);I. Composition analysis Composition analysis by GC-MS;I.Composition analysisExample;II.Glycan ReleaseEnzymatic (N-glycans);II.Glycan ReleaseEnzymatic (N-glycans);II.Glycan ReleaseEnzymatic (O-glycans);II.Glycan ReleaseChemical;II.Glycan ReleaseChemical (β-Elimination);II.Glycan ReleaseChemical (β-Elimination with BH3.NH3);II.Glycan ReleaseChemical (ammonia-based β-elimination);III.Glycomics;III.Glycomic AnalysisGlycan purification fo