流式细胞检测资料.pptxVIP

王丽 2015-07-07;What does it mean?;BD FACSVantage; 流式细胞仪的组成;样品规格： 96孔板 或 1.5 mL 小管;工作流程; ;;460 500 540;easyCyte 5HT system;;软件系统;InCyte 开放模块- Flexibility;测量参数;;;荧光——荧光物质吸收符合其波长范围的光能量，内部电子受激上升到高能级。然后受激电子迅速衰落回基态，释放过剩能量成为光子。 激发光谱——能够激发荧光物质的波长范围。 发射光谱——荧光物质的发射波长范围。因为更多的能量消耗在吸收转换而不是荧光转换中，所以发射光波长要高于激发光波长。 FCM多采用氩离子激光器，因为488nm的激光器能够激发多种荧光。光源的谱线愈接近被激发物质的激发光谱的峰值，所产生的荧光信号愈强。 ;荧光信号;荧光染料性能;线性放大——DNA、RNA、总蛋白质含量等的检测。 对数放大——抗原检测等。 荧光信号的面积(FL2－A)——准确反映DNA的含量??? 荧光信号的宽度(FL2－W)——常用来区分双联体细胞。 ;常见荧光素： FITC(异硫氰酸荧光素）：绿色 530nm PE（藻红蛋白）：橙黄色 575nm PerCP(多甲藻黄素叶绿素蛋白）：深红色 675nm PI(碘化丙啶）：橙红色 620nm APC(别藻兰蛋白）：红色 660nm ;常见荧光物质的应用;直方图和点阵图;直方图：可根据单一因素区分细胞亚群;25;荧光补偿;我需要准备什么？;28;实验对照的设计;细胞周期：从一次分裂完成时开始，到下一次分裂完成时为止，为一个细胞周期。（细胞内的 DNA 含量随细胞周期进程发生周期性变化。） DNA 含量： G1（DNA 合成前期， 2C）、 分裂间期 S （DNA 合成期，2C-4C）、 G2（DNA 合成后期，4C） 分裂期 —— M期（DNA 为 4C）。 利用核酸标记的方法，通过流式细胞仪对细胞内 DNA 的相对含量进行测定，可分析细胞周期各时相的百分比。但是分裂期（M期）的前期、中期、后期、末期四个时期，普通流式无法进行定量检测。;1. DNA细胞周期分析;实验步骤及注意事项：;2.早期细胞凋亡检测;2.早期细胞凋亡检测结果;实验步骤 ;细胞凋亡;凋亡的途径;Guava Incyte IC50/EC50 自动分析;39;40;