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选修一：专题二：课题1微生物的实验室培养学案 【课程目标】:了解培养基的基础知识，进行微生物培养和无菌技术的操作。 【课题重点】:无菌技术的操作 【课题难点】：无菌技术的操作 基础知识 一、培养基 1．概念：人们按照微生物对 的不同需求，配制出供其 的营养基质叫培养基。可分为 培养基和 培养基。 2．营养构成：各种培养基一般都含有 、 、 和 ，此外还要满足微生物生长对 、 以及 的要求。 3．培养乳酸杆菌时需在培养基中添加 、培养霉菌时需将培养基PH调至 、培养细菌时需将PH调至 、培养厌氧微生物则需提供 条件。 〖思考1〗从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？ 【补充1】碳源：如CO2、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。 氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有C、H、O、N的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。 二、无菌技术：阅读“无菌技术”，讨论回答下列问题： 一 获得纯净培养物的关键是 ，具体操作如下： 1．对实验操作的 、操作者的 和 进行 。 2．将用于微生物培养的 、 和 等器具进行 。 3．为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在 附近进行。 4．实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与 相接触。 二 消毒和灭菌 1．消毒是指 。常用的方法有 、 、 消毒法。 2．灭菌是指 。常用的方法有： 、 、 灭菌。分别适用于那些用具？ 〖思考2〗无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是什么？ 〖思考3〗利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是什么？ 〖思考4〗物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是 ；随后关闭排气阀继续加热，气压升至 ，温度为 ，并维持 min；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至 时打开锅盖，其目的是防止 。 实验操作----大肠杆菌的纯化培养： 本实验所用的培养基是 ，本实验可分成 和 两个阶段进行。 一制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作步骤是 、 、 、 、 。 〖思考5〗在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的称量操作中，动作要迅速，原因是什么？ 溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是什么？ 〖思考6〗牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供什么等营养物质？ 2． 倒平板：待培养基冷却至 ℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。 其过程是： ①在火焰旁右手拿 ，左手 ； ②使锥形瓶的瓶口 ； ③左手将培养皿 ，右手 ，立刻盖上皿盖。 ④待平板冷却凝固后，将平板 。 〖思考7〗锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？ 〖思考8〗倒平板的目的是什么？ 〖思考9〗若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？ 〖思考10〗配制斜面培养基作用是什么？，试管为什么要加塞棉塞？ 二、纯化大肠杆菌 微生物接种：最常用的是 法和 法。另外还有穿刺接种和斜面接种等。 1．平板划线法是 的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。 其操作步骤是：①将 在酒精灯火焰上灼烧直至 。②在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。③将菌种试管口通过火焰达到 的目的。④将冷却的接种环伸入到 。⑤将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。⑥将皿盖打开一条缝隙，把接种环 ，盖上皿盖，不要划破培养基。⑦灼烧接种环，冷却后从 划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。注意不要将 相连。 ⑧将平板 培养。 〖思考11〗取菌种前灼烧接种环的目的是什么？ 为什么除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环？ 取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是？ 最后灼烧接种环的目的是？ 。 在第1次划线后都从上次划线末端开始的目的是？ 。 2．稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将 进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落。 　系列稀释操作： ①取盛有 mL水的无菌试管6支 ，编号101、102、103、104、105、106。 ②用灼烧冷却的移液管吸取 mL菌液注入编号为101试管中，并吹打3次使之混匀。 ③从101倍液中吸取 mL菌液注入到编号为102试管内吹打均匀，获得102倍液。依此类推。 〖思考12〗系列稀释操作的注意事项是什么？ 〖思考13〗涂布平板操作的步骤是什么？ 结果分析与评价 1　培养未接种培养基的作用是什么？，若有菌落形成，说明什么？ 2　在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落颜色？形态？ 3　培养12h和24h后的菌落大小？ ；菌落分布位置？ 原因？ 〖思考14〗在某培养基上出现了3种特征不同的菌落是什么原因？ 〖思考15〗频繁使用的菌种利用什么法保存？长期保存菌种的方法是什么？