病毒学(Virology)全 武大课件.ppt

;;;;;;病毒学（Virology）;第一章 绪论;（一）病毒的特点;4、病毒的二重性;（二）病毒的定义;(三）、病毒的宿主范围; Euvirus Virus Subvirus Viroid Satellite agent Satellite RNA Satellite virus Prion ;病毒 （Virus）;Plant Viruses;（四）、病毒的起源;逆转录因子（retro element）;四、病毒学研究任务;第二章 病毒学研究的基本方法;一、病毒的分离; 2、局部反应 　　(1)噬菌体—噬菌斑(plaque) 噬菌体感染生长在营养琼脂平板上的细菌所形成的，具有一定大小和形状的透明区域。 　　(2)动物病毒—蚀斑或称空斑(plaque) 　动物病毒感染单层细胞培养所形成的局部病损区域，系由病毒的致细胞病变作用所引起． ;　 致细胞病变作用（Cytopathic effect ， CPE） ： 病毒感染细胞培养引起的细胞显微表现的改变，如细胞聚集成团，肿大、园缩、脱落、细胞融合形成多核细胞、细胞内出现包涵体（inclusion body），乃至细胞裂解等 （３）植物病毒－坏死斑或称枯斑（necrosis spot） 　 植物病毒感染敏感植物叶片所形成的局部病损区域． ;（四）盲传（blind passage） 　将取自经接种而末出现感染症状的宿主或细胞培养的材料，再接种于新的宿主或细胞培养，以提高病毒的毒力或效价．;二、病毒的纯化;（二）病毒纯化的方法;三、病毒的测定（assay of vrvuses）; 2.血细胞凝集试验 血细胞凝集作用（Hemagglution） 许多动物病毒的包膜蛋白或外壳蛋白在一定条件下（温度、pH、离子浓度等）能引起体外的一定种类的脊椎动物红血球细胞凝集，此即血细胞凝集作用。 血细胞凝集试验 由于具有血凝性质的病毒所能凝集血细胞的量与病毒浓度成正比，根据这一原理设计的血细胞凝集试验即可用于病毒定量测定。;待测病毒样品 2倍稀释;（二）病毒的感染性测定（assay of viral infectivity）;1、 噬（蚀）斑测定 （1）噬菌体的噬菌斑测定，琼脂叠层法（agar layer method） 　　一定量的经系列稀释的噬菌体悬液分别与高浓度的敏感细菌，以及半固体营养琼脂均匀混合???，塗布在已铺有较高浓度营养琼脂的平板上，经过孵育培养，在延伸成片的细菌菌苔上出现分散的单个噬菌斑。根据病毒的一次击中（one-hit）动力学性质，一个有感染性的病毒即可引起一个细胞的感染并形成一个噬斑，并且其数目与样品中有感染性的噬菌体颗粒数量成正比，故统计噬斑数目后即可计算出噬菌体悬液效价，并以噬斑形成单位（plague forming units ， PFU）/毫升（ml）表示。;２、动物病毒的蚀斑测定 　　空斑测定 　　转化测定 　　合胞体计数 ３、植物病毒的环死斑测定 　　半叶法;２、终点法（end point method） 取等体积的经倍比稀释的病毒系列稀释液分别接种大量同样的试验单元（如实验动物、鸡胚或细胞培养），经过一段时间孵育后，以试验单元群体的半数（50%）个体出现某一感染反应的病毒剂量，来确定病毒样品的效价，称做半数效应剂量，并以50％试验单元出现感染反应的病毒稀释度的倒数的对数值表示。 根据试验单元及感染反应的性质分为： 半数致死剂量（50% lethal dose, LD50） 半数感染剂量（50% infective dose, ID50） 半数组织培养感染剂量（50% tissue culture infective dose, TCID50）;终点测定实验记录举例;根据Reed和Muench方法 半数效应剂量(LD50, ID50或TC ID50) =50%感染率的高临界稀释度倒数的对数＋距离比×稀释系数的对数． 上式中： 距离比＝ 在上例中，距离比＝71-50/71-13=0.36 稀释系数为10 故LD50=log1/10-3+0.36Xlog10=3.36 即该待测样品的LD50效价是10-3.36;四、病毒的鉴定;（二）病毒的理化性质鉴定 1、电镜技术 2、分析超速离