第6章抗原抗体反应研究资料.ppt

抗原可诱导机体的免疫应答，产生相应的抗体（免疫原性） 并与抗原反应（反应性）。 抗原免疫动物，获得的血清称为抗血清。 ;一、抗血清的制备;初次应答再次应答注意时间间隔，2到4周比较适合大多数动物。;3、抗血清的鉴定和保存 抗血清的鉴定 　　动物血采集后，立即分离出血清，此抗血清在保存或应用前，必须作效价和特异性鉴定。 　（一）双向免疫扩散法鉴定抗体的特异性 　　按双向免疫扩散技术打两排孔，上排放抗原粗提物（如抗原来自动物血清则放相应的混合血清）和纯化抗原，下排加抗血清，进行双扩散18～24h后，仔细观察上下两排孔之间出现的沉淀线。若粗抗原及纯抗原之间皆出现一条沉淀线，且两者互相融合，则证明该动物已产生单价特异性抗体（方法验证的意义）。 　;双向免疫扩散法测定抗血清效价 　　测定抗血清效价有两种稀释方法：一是稀释抗血清，如1/2、1/4、1/8、1/16对倍稀释，分别与一个浓度的纯抗原反应；另一是稀释抗原，即把抗原作对倍稀释或按浓度（如mg/ml）进行稀释，分别与不同浓度的抗血清进行双扩散试验（称为棋盘滴定）。;抗血清的保存 　　抗血清保存有三种方法。第一种是4℃保存，将抗血清清除菌后，液体状态保存于普通冰箱，可以存放3个月到半年，效价高时，一年之内不会影响使用。如若加入甘油则保存期可延长。第二种方法是低温保存，放在－20～－40度，一般保存5年效价不会有明显下降，但应防止反复冻融，反复冻融几次则效价明显降低。因此低温保存应用小包装，以备取出后在短期内用完。;二、单克隆抗体McAb)的制备;1、杂交瘤技术的基本原理 　　杂交瘤抗体技术的基本原理是通过融合两种细胞而同时保持两者的主要特征。这两种细胞分别是经抗原免疫的脾淋巴细胞，小鼠骨髓瘤细胞。 脾淋巴细胞的主要特征是它的抗体分泌功能和能够在选择培养基中生长，小鼠骨髓瘤细胞则可在培养条件下无限分裂、增殖，即所谓永生性。在选择培养基的作用下，只有B细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交才具有持续增殖的能力，形成同时具备抗体分泌功能和保持细胞永生性两种特征的细胞克隆。;2、制备单克隆抗体的基本技术 ;3、人工克隆抗体的制备;五、抗体在抗肿瘤治疗中的作用;第二节：抗原抗体的反应原理;第三节抗原抗体反应的应用;凝集反应：细菌和红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后，可出现肉眼可见的凝集小块。早在1896年，Widal就利用伤寒病人的血清与伤寒杆菌发生特异性凝集的现象，有效地诊断伤寒病。至1900年在特异性血凝现象的基础上发现了人类血型。 ;1、常用于新生儿溶血症、自身免疫性溶血症、特发性自身免疫性贫血和医源性溶血性疾病等的检测。 ;本病症状之轻重差异很大，一般ABO血型不合者症状较Rh血型不合者轻。病儿常于生后24小时以内或第二天出现黄疸，并迅速加重。随黄疸加深可出现贫血、肝脾肿大，严重者发生胆红素脑病。 ;A 型血 A凝结源 抗B凝结素 B 型血 B凝结源 抗a凝结素 O 型血 ab凝结源都无 抗A B凝结素 AB 型血 AB凝结源 无ab凝结素;补体结合试验;补体结合试验是一种传统的免疫学技术，能够沿用至今说明它本身有一定的优点：①灵敏度高。补体活化过程有放大作用，比沉淀反应和凝集反应的灵敏度高得多，能测定极低浓度抗体。②特异性强。各种反应成分事先都经过滴定，选择了最佳比例???出现交叉反应的机率较小，尤其用小量法或微量法时。③应用面广，可用于检测多种类型的抗原或抗体。④易于普及，试验结果显而易见；试验条件要求低，不需要特殊仪器或只用光电比色计即可。 　　补体结合试验可应用在以下几方面：①传染病诊断。病原性抗原及相应抗体的检测。②其他抗原的检测。例如肿瘤相关抗原、血迹中的蛋白质鉴定、HLA分型等。③自身抗体检测（抗原或抗体是已知的）。