冷冻保存原理-张兆旺答案.ppt

冷冻保存生物材料理论与实践 ;;（1）物理损伤（胞内冰晶）;快速降温的结局;胞内冰晶的预防;（2）化学损伤（渗透效应或溶液效应、胞外冰晶）;;（3）低温损伤和低温打击;低温打击（cold shock）;（4）抗冻保护剂的化学毒性;化学毒性;（5）破裂损伤;相变;（6）渗透性休克;细胞对皱缩和膨胀的耐受度;渗透压缓冲液;脱出细胞抗冻护剂时注意事项;2.克服冷冻、解冻对细胞损伤的理论和实践;（1）玻璃化学说（vitrification）;物质的玻璃态;玻璃态形成的条件;3）玻璃态与结晶态的区别;（2）最适降温速度;细胞不同最适降温速度不同;最适降温速度与细胞存活率;最适降温速度与细胞存活率;（3）抗冻保护剂的使用：;抗冻保护剂（cryoprotective agents）;1）渗透性抗冻保护剂;2）非渗透性抗冻保护剂;3）抗冻保护剂的作用原理;第二;第三;第四;（4）过冷状态与植冰;;过冷程度与玻璃化有关;植冰温度;（5）玻璃化溶液??采用;;脱毒——脱出胞内抗冻剂;非渗透性的高分子抗冻保护剂;低化学毒性;（三）胚胎的冷冻保存方法与胞内外变化分析;1、常规冷冻法;;;;;玻璃化转相温度;;2.玻璃化冷冻法;;;玻璃化溶液;玻璃化溶液添加的成分功能;胚胎一步法玻璃化冷冻保存法;胚胎二步法玻璃化冷冻法;二步法冷冻处理的优点;3.解冻方法;(1)常规冷冻法的解冻方法;;脱玻璃化（divitrification）;;气泡的作用;(2)玻璃化冷冻解冻方法：;防止脱玻璃化;防止化学毒性的操作;尚待解决的问题;4.抗冻剂的脱除;;（1）小鼠：;（2）兔：;（3）绵羊：;（4）山羊：;（5）马和猪：;（6）牛：;（7）人：;;;（四）卵母细胞的冷冻保存;;（1）常规冷冻法：;抗冻液与装管方法;冷冻程序;（2）玻璃化冷冻法;1.细管法;2.微滴法;微滴法操作过程;微滴法存在如下缺陷;3.电子显微镜铜网法;操作过程;效果;4.开放式拉长塑料细管法(OPS法);操作方法;特点与效果;玻璃微细管法(GMP法);如何解决存在的问题;新的改进;(五)应用前景和存在的问题;;问题;问题;问题;问题;克服冷冻损伤的措施