第八讲 沉析 [Chapter 8 Precipitation].pptVIP

Chapter 8沉 析Precipitation;什么是沉析？ 沉析法纯化蛋白质的优点有哪些？ 沉析的一般操作步骤是什么？ 何谓盐析？其原理是什么？ 盐析操作时常用的盐是什么？ 影响盐析的主要因素有哪些？;有机溶剂沉析法的原理是什么？ 影响有机溶剂沉析的主要因素有哪些？ 等电点沉析的工作原理是什么？ 其它常用的沉析方法有哪些？;何谓沉析？;一般沉析操作的过程;盐析(Salt induced precipitation);;The most common type of precipitation for proteins is Salt induced precipitation. Protein solubility depends on several factors. It is observed that at low concentration of the salt, solubility of the proteins usually increases slightly. This is termed Salting in. But at high concentrations of salt, the solubility of the proteins drops sharply. This is termed Salting out and the proteins precipitate out. ;盐析原理;盐析过程;Electric double layer;离子强度对盐析过程的影响;β和Ks的物理意义;Ks盐析法：在一定pH和温度下，改变体系离子强度进行盐析的方法； β盐析法：在一定离子强度下，改变pH和温度进行盐析； 其中，Ks盐析法由于蛋白质对离子强度的变化非常敏感，易产生共沉淀现象，因此常用于提取液的前处理。 而β盐析法由于溶质溶解度变化缓慢，且变化幅度小，因此分辨率更高，常用于初步的纯化。;盐析用盐的选择;选用盐析用盐的几点考虑 ;常用的盐析用盐;影响盐析的因素;盐析用盐的用量选择;;有机溶剂沉淀;常用的有机溶剂沉析剂;有机溶剂沉析的特点;溶剂选择;影响有机溶剂沉析的主要因素;等电点沉淀;;由于在等电点附近，溶质仍然有一定的溶解度，等电点沉淀法往往不能获得高的回收率，因此等电点沉淀法通常与盐析、有机溶剂沉淀法联合使用 操作时的注意事项： （1）由于无机离子的影响，蛋白质的等电点通常会发生“漂移”，阳-高，阴-低 （2）溶质的稳定性 （3）盐析效应;其它沉淀法;水溶性非离子型聚合物沉淀剂;;成盐类复合物沉析剂;In this type of precipitation, a metal ion will bind to a part of the protein. An advantage of this type of precipitation is that they have great precipitating power in a dilute solution. These ions can be classified into three groups. Ions such as Mn2+, Fe2+, Co2+, Ni2+, Zn2+, and Cd2+ will bind strongly to carboxylic acids and to nitrogenous compounds. Ca2+, Ba2+, Mg2+, and Pb2+ will mainly bind to carboxylic acids. Finally, Ag+, Hg2+, and Pb 2+ will bind strongly to sulphydryl groups.;离子型表面活性剂;离子型多聚物沉析剂;粘多糖沉淀剂;分离核酸用沉析剂;选择性变性沉淀法;本章作业