第十二章 嗜肝DNA病毒科(Hepadnaviridae).docVIP

PAGE  PAGE 8 第十二章 嗜肝DNA病毒科（Hepadnaviridae） 乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus, HBV）不仅能引起人类急慢性肝炎，而且还可导致原发性肝癌的形成。乙型肝炎是一种世界性传染病，我国是高流行区。我国有50%～70%的人群受过乙型肝炎病毒的感染，有8%～10%为乙型肝炎病毒表面抗原携带者，约有一亿人口。根据1980年全国调查表明，我国现患肝炎病人约2000万人，其中60% 以上为慢性肝炎患者。然而，遗憾的是至今尚无有效的办法来防治HBV的感染。目前，乙肝疫苗虽已开始研制并应用，但是，即使普及疫苗接种，现有的乙肝患者及带毒者的治疗，至少在今后的50的内仍然是一个严重问题，何况在我国，疫苗推广尚存在问题，而乙肝的治疗更为困难。近年来，由于基因重组技术的发展，加速了HBV的研究进程，HBV的基因结构，转录及增殖特性已基本搞清，并且整合在原发性肝癌细胞染色体上的HBV DNA序列亦被证实。同时采用多种载体系统重组HBV DNA片段，在体外已成功地表达了乙型肝炎病毒表面抗原（HbsAg），乙型肝炎病毒核心和e抗原（HBcAg/HbeAg），可望采用基因工程的方法来制备合适的HBV疫苗替代昂贵的HBV血源性疫苗。 第一节 嗜肝DNA病毒科的分类与毒粒结构 一、嗜肝DNA病毒的分类 乙型肝炎病毒于1986年由国际病毒命名委员会正式划归为一个新病毒科的成员，该科下设正嗜肝DNA病毒属（Orthohepadnavirus）和禽嗜肝DNA病毒属（Avihepadnavirus）。属于本科的还有东方土拨鼠肝炎病毒（Woodchuck hepatitis virus, WHV）、地松鼠肝炎病毒（Ground squirrel hepatitis virus, GSHV）和鸭乙型肝炎病毒（Duck hepatitis virus, DHBV）。本科病毒具有类似的毒粒结构，构有嗜肝特性，有明显的种属特异性，并可导致持续性病毒感染。HBV、WHV等可引起慢性活动性肝炎和原发性肝细胞癌。 二、嗜肝病毒的毒粒结构 完整的毒粒即Dane颗粒，直径42 nm，由外膜和核壳组成，后者含有一个环状DNA分子、DNA多聚酶、DNA结合蛋白以及蛋白激酶活性。完整的HBV颗粒由外膜蛋白（HbsAg）与核衣壳组成，核衣壳由HBcAg构成，其核心部分含有病毒DNA，DNA多聚酶/逆转录酶，蛋白激酶及DNA结合蛋白，另一种存在于急慢性乙肝病人血清中呈可溶性状态的蛋白称之为HBeAg，它是由HBV C基因（不含前C区）编码的，当用2-硫基乙醇，热或轻微的蛋白酶处理HBV核心颗粒时，可使HBcAg转变成HBeAg，亦有人认为HBeAg能形成多聚体形式，可能是病毒核心的一结构成分。 （一）外膜蛋白 HBsAg的抗原性比较复杂，有一个属特异性的共同抗原决定簇“a”和至少两个亚型决定簇“d/y和w/r”。“a”决定簇又可分为a1、a2、a3；“W”决定簇又可分为W1、W2、W3、W4，此外，尚有少见的亚型决定簇q、g、n、x和t。其中最常见的主要血清型为adw、adr和ayw。亚型的地区分布不同，我国以adr为主，adw次之。新疆、西藏、内蒙地区以ayw为主。 外膜由蛋白、多糖和类脂组成。糖蛋白插入双层类脂膜。毒粒的外膜含有主要蛋白、中蛋白和大蛋白三种蛋白。 1．主要蛋白：含226个氨基酸，由S基因编码，有糖基化与非糖基两种形式，前者为GP27，后者为GP24，两者的比例大致为1︰1。GP27在146位Asn有一N连结的多糖分子。根据不同亚型的6个主要蛋白的氨基酸序列分析表明，它有3个疏水区段，7～23，80～98和169～226，为两个亲水区段所隔开。疏水区段的氨基酸比较保守，氨基酸的变异主要发生在亲水区段。Tiollais等（1983）认为两个主要蛋白分子通过二硫键形成的二聚物是一个结构单位，它具有完全的HBsAg抗原性，其中第二个亲水区段，即122～155位，含有HBsAg主要的属和亚型的抗原决定簇。 2．中蛋白：由281个氨基酸组成，由前S2和S基因编码。它是糖蛋白，根据糖基化程度，有两种类型：GP33和GP36。GP33含有一个多糖分子，而GP36含两个多糖分子。前S2基因编码的55个氨基酸中亲水性的属多，在外膜表面含一个抗原决定簇，后者与二硫键无关，其免疫原性较主要蛋白为强。 3．大蛋白：由前S1、前S2和S基因编码，它有糖基化（GP42）和非糖基化（GP39）两种类型。不同亚型的大蛋白的氨基酸长度不同：ay亚型有389个氨基酸，ad亚型有400个氨基酸。GP42含有一个N连结的多糖，至少N端一部分露在外膜的表面。 每一毒粒含有300～400个主要蛋白分子和40～80个中蛋白和大蛋白分子。 （二）核衣壳蛋白