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考马斯亮蓝法测蛋白质含量
⒈掌握考马斯亮蓝法定量测定蛋白质的原理与方法。
⒉熟练分光光度计的使用和操作方法。;★考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置，由465nm变为595nm，溶液的颜色也由棕红色变为蓝色。经研究认为，染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸）和芳香族氨基酸残基相结合。
★在595nm下测定的吸光度值，与蛋白质浓度成正比;⒈器材。
可见分光光度计、试管、试管架、刻度移液管、移液枪
⒉试剂。
⑴水
⑵考马斯亮蓝试剂
称取考马斯亮蓝G250 100㎎，加95％乙醇100ml，溶解后加85％H３ＰＯ４， 100 ml，加水稀释至1000ml，存于棕色瓶。
⑶蛋白质标准溶液
准确称取经微量凯氏定氮法校正的结晶牛血清清蛋白，配置1mg/ml标准溶液。;㈠标准曲线的制作
取试管6只，按下表进行编号并加入试剂，充分摇匀。;每支试管加入5ml考马斯亮蓝试剂;取3支试管，各吸未知浓度
蛋白液0.1ml，分别加考
马斯亮蓝试剂5ml;五、注意事项
⒈待测液中蛋白质浓度不可过高或过低，应控制在100~800μg／ml为宜。
⒉比色测定时，考马斯亮蓝易吸附在比色皿表面，对后续测定造成影响，因此测定结束后用无水乙醇清洗比色皿。
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