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色谱分析法;本章重点： 1. 理解色谱分离的基本原理； 2. 掌握色谱法的基本概念和术语； 3. 掌握色谱法的定性和定量方法; 4. 掌握气相\液相色谱的分析原理、仪器结构 和在食品分析中的应用.;描述: 色谱法是一种分离技术. 混合物最有效的分离、分析方法. 色谱法分离发生在色谱柱上. ; 1906年,俄国植物学家茨维特 对植物叶的色素成分进行研究 时,使用右图装置: 将植物叶子的萃取物倒入填有碳酸钙的直立玻璃管内,然后加入石油醚使其自由流下,结果色素中各组分互相分离形成各种颜色的谱带.这种分离物质的方 法因此得名为色谱法.;气相色谱仪;色谱柱：色谱法的核心部件，混合物在此实现分离。 ; 气相色谱仪;;液相色谱仪流程;1.2 色谱法分类 ;(3)其他色谱方法;1.3 色谱法的特点; （2） 灵敏度高 可以检测出μg.g-1(10-6)级甚至ng.g-1(10-9)级的物质量。 （3） 分析速度快 一般在几分钟或几十分钟内可以完成一个试样的分析。 （4） 应用范围广 气相色谱：沸点低于400℃、结构稳定的各种有机或无机试 样的分析。 液相色谱：高沸点、热不稳定、生物试样的分离分析。 ; （一）组分分离 当流动相中样品混合物经过 固定相时，就会与固定相发生作 用，由于各组分在性质和结构上 的差异，与固定相相互作用的类 型、强弱也有差异，因此在同一 推动力的作用下，不同组分在固 定相滞留时间长短不同，从而按 先后不同的次序从固定相中流出。;（二）色谱流出曲线和色谱峰 由检测器输出的信号强度对时间作图，所得曲线称为色谱流出曲线。曲线上突起部分就是色谱峰。 ; 色谱流出曲线和色谱峰 基线：在实验操作条件下，色谱柱后没有样品组分流出时的流 出曲线称为基线，稳定的基线应该是一条水平直线。 峰高：色谱峰顶点与基线之间的垂直距离，以（h）表示。 ;（三）保留值 1.死时间tM 不被固定相吸附或溶解的物质进入色谱柱时，从进样到出现峰极大值所需的时间称为死时间，它正比于色谱柱的空隙体积，如下图。 ;2. 保留时间tR 试样从进样到柱后出现峰极大点时所经过的时间，称为保留时间，如下图。 组分在色谱柱中的保留时间tR包含组分通过柱子的时间和组分在固定相中滞留的时间，所以tR实际上是组分在固定相中保留的总时间。;4 分离度; 色谱分离中的四种情况：;分离度的表达式：;1.5 定性和定量分析 1 定性分析 在色谱条件一定时，任何一种物质都有确定的保留时 间。 通过比较已知物和未知物的保留参数或在固定相 上的位置，即可确定未知物是何种物质。 ;利用纯物质定性的方法 利用保留值定性：通过对比试样中具有与纯物质相同保留值的色谱峰，来确定试样中是否含有该物质及在色谱图中的位置。不适用于不同仪器上获得的数据之间的对比。 利用加入法定性：将纯物质加入到试样中，观察各组分色谱峰的相对变化。;2 定量分析 在一定色谱条件下，组分i的质量（mi）与检测器响应讯号（峰面积Ai或峰高hi）成正比。色谱定量分析的依据;3 定量分析方法 （1） 外标法(标准曲线法)：将欲测组分的纯物质配制成不同浓度的标准溶液进行色谱分析，以峰面积对浓度作图。测得样品的信号后从标准曲线上查出对应浓度。;（2） 内标法 准确称取样品（m），加入一定量（ms）某种纯物质作为内标物，进行色谱分析，根据被测物与内标物的相应峰面积（或峰高）和相对校正因子，求出被测组分的含量。 ; 内标物要满足以下要求： （a）试样中不含有该物质； （b）与被测组分性质比较接近； （c）不与试样发生化学反应； （d）出峰位置应位于被测组分附近。;（3） 归一化法 将试样中所有组分的含量之和按100%计算，以它们相应的色谱峰面积或峰高为定量参数，通过下式计算各组分的含量：;§2 气相色谱法 ; 气相色谱仪;气相色谱仪主要包括五部分： 1、载气系统 2、进样系统 3、分离系统 4、温控系统 5、检测系统;压缩气体钢瓶;气相色谱对载气的基本要求： （1）纯净 通过活性炭或分子筛净化器，除去载气中的水分、氧等有害杂质。 （2）稳定 采用稳压阀或双气路方式：;2、进样系统 进样装置和汽化室 进样通常用微量注射器和进样阀将