细胞培养技术教程方案.pptVIP

细胞培养原理;基础技能;避免污染的方法;干热灭菌法:在干燥环境(如火焰或干热空气)进行灭菌的技术。 分类： 焚烧：用火焚烧是一种彻底的灭菌方法，破坏性大，仅适用于废弃物品或动物尸体等； 烧灼：直接用火焰灭菌，通常将灭菌物品迅速通过火焰3~4次。适用于实验室的金属器械(镊、剪、接种环等)、玻璃试管口和瓶口等的灭菌； 干烤：在干烤箱(hot air sterilizer)内进行，加热至160℃～170℃维持2小时，可杀灭包括芽胞在内的所有微生物。适用于耐高温的玻璃器皿、瓷器、 玻质注射器等； 红外线(infrared)：是波长为770nm～1000μm的电磁波，以1μm～10μm波长的热效应最强。红外线的热效应只能在照射到的表面产生，不能使物体 均匀加热，常用于碗、筷等食具的灭菌； 微波(microwave)：波长为1mm～1000mm的电磁波统称为微波，可穿透 玻璃、塑料薄膜与陶瓷等物质，但不能穿透金属表面。微波炉的热效应 分布不均匀，灭菌效果不可靠，用于非金属器械及食具消毒。;湿热灭菌：以高温高压水蒸气为介质，由于蒸汽潜热大，穿透力强，容易使蛋白质变性或凝固，最终导致微生物的死亡，所以该法的灭菌效率比干热灭菌法高。 湿热灭菌法分为： 煮沸灭菌法：灭菌效果较差，常用于注射器、注射针等器皿的 消毒。必要时可加入抑菌剂。 巴氏消毒法：利用较低的温度既可杀死病菌又能保持物品中 营养物质风味不变。 流通蒸汽灭菌法：适用于消毒以及不耐高热制剂的灭菌， 但不能保证杀灭所有芽孢，是非可靠的灭菌方法。 间歇蒸汽灭菌法：方法同流通蒸汽灭菌法，但要重复3次以上。 不耐高热的含糖或牛奶的培养基。 ;高压蒸汽灭菌法： 将需灭菌的物品放在高压锅(autoclave)内，加热时蒸汽不外溢， 高压锅内温度随着蒸汽压的增加而升高。在103.4kPa蒸汽压下， 温度达到121.3℃，维持30min。 可杀灭包括芽胞在内的所有微生物，灭菌效果最好。 适用于普通培养基、生理盐水、手术器械(金属)、玻璃容器、离心管、EP管、枪头等耐高热物品的灭菌。;高压蒸汽灭菌法—注意事项： 包裹不应过大、过紧，一般应小于30cm×30cm×50cm； 高压锅内的包裹不要排得太密，以免妨碍蒸气透入，影响灭菌效果； 易燃、易爆物品，如碘仿，苯类等，禁用高压蒸气灭菌； 锐性器械，如刀、剪不宜用此法灭菌，以免变钝； 瓶装液体灭菌时，要用玻璃纸和纱布包扎瓶口；如有橡皮塞时，应插入针头排气； ----瓶口不能封死，以免被压变形 注明灭菌日期和物品保存时限，一般可保留l～2周。;过滤除菌： 用物理阻留的方法将液体或空气的细菌除去，以达到无菌目的。 主要用于血清、毒素、抗生素等不耐热生物制品及空气的除菌。 所用的器具是含有微小孔径的滤菌器(filter)。 常用的滤菌器是薄膜滤菌器（0.45μm和0.22μm孔径）， 直接加在注射器头部。 繁殖型微生物约1μm， 芽孢为0.5μm或以下， 支原体为0.1~0.8μm。 ;辐射灭菌： 利用电磁辐射产生的电磁波杀死大多数物质上的微生物的一种有效方法。 用于灭菌的电磁波有： 微波：可以通过热产生杀死微生物的作用。 紫外线：破坏微生物细胞中的DNA或RNA，抑制DNA的复制与转录。 ---穿透力很弱，主要用来消毒。 X射线和γ射线： γ射线的能量高、穿透力强，可使细胞内各种活性物质发生化学变化，从而使细菌损伤或死亡。 ---注意安全使用；成本高 常用的放射源：Co60---γ射线。;（二）消毒(disinfection) ： 指杀死病原微生物、但不一定能杀死细菌芽孢的方法。 常用的消毒法： 加热消毒法：加热使微生物细胞中的蛋白质凝固、酶失活。最常用的加热消毒法是煮沸。 药剂消毒法：用于消毒的化学药剂称为消毒剂。 常用的消毒剂—75%酒精，0.2%新洁尔灭(苯扎溴铵)。 紫外线消毒：紫外线能够破坏微生物细胞中的DNA或RNA。缺点：紫外线穿透性差，光照强度随距离增大而降低。 主要应用于空气、物品表面的预防性消毒。;（三）防腐(antisepsis)： 利用某种理化因素完全抑制微生物的生长繁殖。 常用的防腐方法： 低温：冷藏(+4℃)、冷冻(-