10.10核酸2.pptVIP

核酸的分子组成;3.5 DNA和基因组;DNA的基本功能是以基因的形式荷载遗传信息，并作为基因复制和转录的模板。它是生命遗传的物质基础，也是个体生命活动的信息基础。;几个基本概念;转录生成的RNA一部分用于指导蛋白质的合成，称为信使RNA（mRNA） 由mRNA指导蛋白质合成的过程称为翻译。 蛋白质是在核糖体中合成的，核糖体中所含的RNA称为核糖体RNA（rRNA）。 转移RNA（tRNA）的功能是将氨基酸转运到核糖体的特定部位用于蛋白质合成。;3.5.1. 基因和基因组;基因组DNA序列按其结构和功能可分为以下几类： 1、基因序列和非基因序列 2、编码序列和非编码序列 3、单一序列和重复序列 基因组学（genomics）是研究生物体基因和基因组的结构的组成，稳定性及功能的一门学科 。 包括：结构基因组学 功能基因组学;3.6 RNA的结构和功能;RNA的结构特点;RNA的类型、分布、功能;一级结构特点： —由70-90个核苷酸组成 —含 10~20% 稀有碱基，如双氢尿嘧啶（DHU） —3‘末端为 — CCA-OH，tRNA所转运的氨基酸就连接在此末端上 — 5′末端大多数为鸟嘌呤核苷酸G;;tRNA的二级结构: ——三叶草形 氨基酸臂 DHU（D）环+D臂 反密码子环+反密码子臂 额外环（可变环） TΨC环+TΨC臂;;* tRNA的功能：活化、搬运氨基酸到核糖体，参与蛋白质的翻译。;核糖体RNA(ribosomal RNA，rRNA)是细胞内含量最多的RNA(80％)。 rRNA（ 60％ ）与蛋白质（ 40％ ）结合组成核糖体(ribosome)，为蛋白质的合成提供场所。 核糖体按沉降系数分类：大亚基和小亚基;;大量的茎环结构;3.6.3 mRNA和hnRNA;* 真核生物mRNA的结构特点;3. mRNA分子中有编码区和非编码区。 每分子mRNA可与几个至几十个核糖体结合成串珠样的多核糖体（polysome）。 mRNA转录和翻译是分开进行; 1. mRNA一边转录一边翻译。 2. mRNA分子包含有先导区、翻译区和非翻译区。;把DNA所携带的遗传信息，按碱基互补配对原则，抄录并传送至核糖体，用以决定其合成蛋白质的氨基酸排列顺序。;3.6.4 其他小分子RNA; 一些小的双链RNA可以高效、特异的阻断体内特定基因表达，促使mRNA降解，诱使细胞表现出特定基因缺失的表型，称为RNA干扰（RNA interference，RNAi，也译作RNA干预或干涉）。它是体内抵御外在感染的一种重要保护机制。;核酶（ribozyme）;3.7 核酸的理化性质 Physical and chemical properties of NAs;二、核酸的溶解度与粘度;三、核酸的酸碱性质; 嘌呤及嘧啶具有强烈的紫外吸收，核酸分子最大吸收峰在260nm，可用于定量测定。;增色效应： 将核酸水解成核苷酸时，紫外吸收值增加30-40%，这种现象称作增色效应。这是由于双螺旋结构中，碱基有规律的紧密堆积降低了其对紫外光的吸收。 核酸变性时碱基暴露，OD260增加。 减色效应： 核酸复性时,OD260降低到原来的水平;1. DNA或RNA的定量 OD260=1.0相当于50μg/ml双链DNA 40μg/ml单链DNA（或RNA） 20μg/ml寡核苷酸 1cm光径的比色杯测定核酸OD260时，1 μg/ml的DNA溶液吸光度为0.020，同样浓度的RNA为0.024，核酸含量： DNA浓度（μg/ml）= OD260/0.020, RNA浓度（μg/ml）= OD260/0.024 2.判断核酸样品的纯度 DNA纯品: OD260/OD280 = 1.8 RNA纯品: OD260/OD280 = 2.0;3.7.3 核酸结构的稳定性; 3.7.4 核酸的变性、复性、分子杂交;;部分变性DNA的电镜图像;3.引起核酸变性的因素： 过量酸、碱，加热，变性试剂如尿素、甲酰胺以及某些有机溶剂如乙醇、丙酮等。;DNA变性;增色效应：DNA变性时其溶液OD260增高的现象。;热变性——实验室常用的方法;Tm：紫外光吸收值达到最大值的50%时的温度称为DNA的解链温度，又称融解温度（Tm）。 其大小与G+C含量成正比。; ;(2)溶液的离子强度;(3)溶液的pH值;(4)变性剂;（二）复性