选修一5-3血红蛋白的提取和分离资料.pptVIP

我们可从鸡血中提取得到DNA，DNA到底有着怎样的特性？ 假如想提取得到蛋白质（如血红蛋白），我们能成功吗？蛋白质有没有什么特性呢？该用什么动物的血呢？;课题3 血红蛋白的提取和分离;一. 蛋白质分离的原理和方法;凝胶色谱法：又称分配色谱法 电泳法;（一）凝胶色谱法; ;;;凝胶色谱法分离蛋白质过程的动画演示;相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时;调节缓冲剂的 就可以制 得在 使用的缓冲液。;使用的是20mmol/L的pH为7.0的磷酸缓冲液。 目的是利用缓冲液模拟细胞内的pH环境，保证 血红蛋白的正常结构和功能，便于观察（红色） 和材料的科学研究（活性）。;（三）电 泳;+;凝胶电泳原理示意图; 在一定pH下，使蛋白质基团带上正电或负电；加入带负电荷多的SDS，掩盖了不同蛋白质间的电荷差别，形成“蛋白质－SDS复合物”，使蛋白质迁移速率完全取决于分子大小。 ;二、实验操作;（一）样品处理; 血红蛋白只存在于红细胞内，含有四条肽链,每条肽链环绕一个亚铁血红素基团，此基团可携带一分子氧或一分子二氧化碳，血红蛋白因含有血红素而呈红色。;;在蒸馏水和甲苯作用下搅拌，红细胞破裂释放;高速离心;（二）粗分离——透析;利用透析袋透析;（三）纯化——凝胶色谱法;装配好的凝胶柱;1、凝胶色谱柱的制作： ①取长40厘米，内径1.6厘米的玻璃管，两端需用砂纸磨平。 ②底塞的制作：打孔→挖出凹穴→安装移液管头部→覆盖尼龙网，再用100目尼龙纱包好，插到玻璃管的一端。 ③顶塞的制作：打孔→安装玻璃管。 ④组装：将上述三者按相应位置组装成一个整体。 ⑤安装其他附属结构。;材料：交联葡聚糖凝胶G-75；20mmol/L磷酸缓冲液 装填:;注意： 1、凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间 的空隙。 ;3.样品的加入和洗脱;3.样品加入与洗脱;开始进行层析;收集得到的纯化后的蛋白;（四）纯度鉴定;知识总结;1.凝胶色谱柱的制作过程中为什么底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面？;3.本实验装填凝胶色谱柱选择的材料是交联葡聚糖凝胶G-75 ，“G”表示什么？75代表什么？; 教学反馈 ;3．电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷（ ）的电极移动。 A相同 B相反 C相对 D相向 4. 哺乳动物和人的成熟的红细胞中的（ ）与氧气的运输有关。 A血红蛋白 B肌红蛋白 C肌动蛋白 D肌球蛋白;5．血液由血浆和各种血细胞组成，其中（ ）的含量最多。 A白细胞 B血小板 C红细胞 D淋巴细胞 6．为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗凝血剂（ ）。 A. NaCl B.甲苯 C.蒸馏水 D.柠檬酸钠;7．将搅拌好的混合液转移到离心管中，离心后，可以明显看到试管中的溶液分为4层，其中第3层是（ ） A无色透明的甲苯层 B脂溶性物质的沉淀层 C血红蛋白的水溶液 D其他杂质的暗红色沉淀物;1、随着人类跨入蛋白质组时代，对蛋白质的研究和应用越来越深入，首先要做的一步是 A 弄清各种蛋白质的空间结构 B 弄清各种蛋白质的功能 C 弄清各种蛋白质的合成过程 D 获得高纯度的蛋白质;2、用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，关于蛋白质的叙述，正确的是 A 相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对分子质量较大的蛋白质 B 相对分子质量较小的蛋白质行程小于相对分子质量较大的蛋白质 C 相对分子质量较小的蛋白质行程等于相对分子质量较大的蛋白质 D 二者根本无法比较;3、使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于 A 电荷的多少 B 分子的大小 C 肽链的多少 D 分子形状的差异 4、在采血容器中加入柠檬酸钠的目的是 A 调节pH B 维持红细胞的能量供应 C 防止微生物生长 D 防止血液凝固;5、一分子血红蛋白最多可携带的 O2分子数和CO2分子数分别是 A 4、2 B 4、4 C 2、1 D、1、1 6、记住样品处理中的血红蛋白溶液离心后分层顺序自上而下是： 有机溶剂-----脂类物质-----血红蛋白溶液------红细胞破碎物沉淀