3蛋白质20141008.ppt

三、蛋白质的一级结构;（一）、蛋白质结构的主要层次;（二）蛋白质的一级结构 ; ;将肽段顺序进行叠联以确定完整的顺序;基本策略： 片段重叠法＋氨基酸顺序直测法 基本步骤： 测定蛋白质分子中多肽链数目； 拆分蛋白质的多肽链，断开多肽链间、链内二硫键 分析每一条多肽链的氨基酸组成； 鉴定多肽链N－末端、C－末端氨基酸残基； 裂解多肽链成较小的片段； 测定各肽段的氨基酸顺序； 片段重叠法重建完整多肽链一级结构； 确定半胱氨酸残基间形成二硫键交联桥的位置。;（1）测定蛋白质分子中多肽链的数目;（3）二硫键的断裂;Sanger法: 在碱性条件下，DNFB与肽链N-端的游离氨基作用，生成二硝基苯衍生物（DNP-多肽）。 在酸性条件下，DNP-多肽易于水解为黄色DNP-氨基酸。通过乙醚抽提分离、色谱分析可以鉴定得到的不同DNP-氨基酸。;碱性条件下，DNS与N-端氨基酸的游离氨基作用，得到丹磺酰-多肽，然后水解，得到具有很强荧光的丹磺酰-氨基酸，检测灵敏度可以达到1?10-9 mol;N端氨基酸测定（3）：Edman 化学降解法;多肽与肼在无水条件下加热，C-端氨基酸即从肽链上解离出来，其余的氨基酸则变成肼化物。 肼化物与苯甲醛缩合成不溶于水的物质而与C-端氨基酸分离。 ;（5）多肽链的部分裂解;Trypsin ：只断裂Lys或Arg的羧基参与形成的