第二章蛋白质的共价结构资料.pptVIP

第二章 蛋白质的共价结构;蛋白质通论蛋白质的化学组成和分类;蛋白质含量的测定——凯氏定氮法;单纯蛋白质的分类; 结合蛋白质的分类;蛋白质分子的形状和大小根据形状和溶解度分为三大类：;蛋白质的大小;估算氨基酸残基数目;蛋白质功能的多样性;蛋白质功能的多样性;  二.肽; ;肽与肽键;肽与肽键; ; 肽键平面;不可能的空间构象; ; ;;谷胱甘肽;二硫键; ;A.样品必需纯（97%以上）； B.知道蛋白质的分子量； C.知道蛋白质由几个亚基组成； D.测定蛋白质的氨基酸组成；并根据分子量计算每种氨基酸的个数。 E.测定水解液中的氨量，计算酰胺的含量。; ; ; ;肼解法：此法是多肽链C-端氨基酸分析法。多肽与肼在无水条件下加热，C-端氨基酸即从肽链上解离出来，其余的氨基酸则变成肼化物,即(n-1)个氨基酸酰肼。肼化物能够与苯甲醛缩合成不溶于水的物质而与C-端氨基酸分离。;D.氨肽酶法：氨肽酶是一种肽链外切酶，它能从多肽链的N-端逐个的向里水解。根据不同的反应时间测出酶水解所释放出的氨基酸种类和数量，按反应时间和氨基酸残基释放量作动力学曲线，从而知道蛋白质的N-末端残基顺序。最常用的氨肽酶是亮氨酸氨肽酶，水解以亮氨酸残基为N-末端的肽键速度最大。; ;酶解法:胰蛋白酶，糜蛋白酶，胃蛋白酶，嗜热菌蛋白酶，羧肽酶和氨肽酶 化学法：溴化氰水解法，它能选择性地切割由甲硫氨酸的羧基所形成的肽键。;7.测定每个肽段的氨基酸顺序。 8.确定肽段在多肽链中的次序：利用两套或多套肽段的氨基酸顺序彼此间的交错重叠，拼凑出整条多肽链的氨基酸顺序。 9.确定原多肽链中二硫键的位置：一般采用胃蛋白酶处理没有断开二硫键的多肽链，再利用双向电泳技术分离出各个肽段，用过甲酸处理后，将每个肽段进行组成及顺序分析，然后同其它方法分析的肽段进行比较，确定二硫键的位置。;蛋白质一级结构测定的步骤;蛋白质序列数据库;四.蛋白质的氨基酸序列 与生物功能;细胞色素C;细胞色素C 系统树（进化树）; 同源蛋白具有共同的进化起源 肌红蛋白（Myoglobin，Mb ）：哺乳动物的肌肉中储存氧气的蛋白质，水生的哺乳动物体内尤为发达（如鲸鱼），因此，它们可以憋气很长时间，研究用Mb一般由鲸鱼提供。一级结构：单条肽链，153个aa，其中的83个aa为保守序列（即同源蛋白质均相同，是决定功能的最重要序列），含有一分子血红素辅基，其中保持Fe2+，血红素通过Fe2+以配位键吊在肽链的His的咪唑基上。O2将结合在Fe2+上。 血红蛋白（Hemoglobin，Hb ） ：四聚体，一级结构：4条链，α2β2。α141，β146，每条肽链都结合着一分子的血红素，每条肽链都有保守序列。 血液凝固与氨基酸序列的局部断裂 ;肌红蛋白（Myoglobin，Mb ）和血红蛋白（Hemoglobin，Hb ） ;五. 肽和蛋白质的人工合成; 固相肽合成（solid-phase peptide synthesis）;本章小结