北科大微生物实验1、细菌的形态结构观察和染色答题.ppt

实 验 一;目的要求;安全事项;奥林帕斯(OLYMPUS)双筒生物显微镜;奥林帕斯生物显微镜的使用方法;显微镜保养和使用中的注意事项;油镜使用的原理 ;基本原理 ;染色剂和染色原理;实验内容（简单染色的方法和步骤）;实验内容（革兰氏染色的方法和步骤）;一、基本原理　　革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。它是1884年由丹麦医师Gram 创立的。革兰氏染色法（Gram?stain）不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细 菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示；染色反 应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G-表示。细菌对于革兰氏染色 的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。革兰氏阳性细菌的 细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时， 由于脱水而引起网状结构中??孔径变小，通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留 在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖含 量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增 加，使结晶紫-碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的 颜色，因此呈现红色。　　革兰氏染色需用四种不同的溶液：碱性染料（basic?dye）初染液；媒染剂 （mordant）；脱色剂（decolorising?agent）和复染液（counterstain）。碱性染 料初染液的作用象在细菌的单染色法基本原理中所述的那样，而用于革兰氏染色 的初染液一般是结晶紫（crystal?violet）。媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的 亲和性或附着力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落，碘（iodine ）是常用的媒染剂。脱色剂是将被染色的细胞进行脱色，不同类型的细胞脱色反 应不同，有的能被脱色，有的则不能，脱色剂常用95％的酒精（ethanol）。复染 液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染液，复染的目的是使被脱色的细胞染上 不同于初染液的颜色，而未被脱色的细胞仍然保持初染的颜色，从而将细胞区分 成G+和G-两大类群，常用的复染液是番红。 ;实验内容（了解抗酸染色的方法和步骤）;抗酸染色原理:分枝杆菌细胞壁含脂质较多,其中主要成分为分枝菌酸,此物具有抗酸性,染色时与石炭酸复红结合牢固,能抵抗酸性乙醇的脱色作用,因此抗酸菌能保持复红的颜色,达到染色目的。???步骤:萋纳石炭酸复红染色,加温促使菌体着色;3%盐酸乙醇脱色;吕氏美蓝复染,未脱色细菌呈红色为抗酸性细菌,脱色经复染呈蓝色的细菌为非抗酸性细菌。 ;实验内容（了解芽孢染色的方法和步骤）;原理是芽胞壁较厚，通透性低而不易着色，但芽胞一旦着色就很难被脱色。因此，先用着色能力强的染液（如孔雀绿或石炭酸复红）在加热条件下染色，使染料既可进入菌体也可进入芽胞，水洗脱色时菌体中的染料被洗脱，而芽胞中的染料仍保留。再用对比度大的复染剂染色后，菌体染上复染剂颜色，而芽胞仍为原来的颜色，这样两者区别开来。;实验内容（了解荚膜染色的方法和步骤）;?荚膜是包围在细菌细胞外的一层黏液状或胶质状物质，其成分为多糖、糖蛋白或多肽?。由于荚膜与染料的亲和力弱、不易着色；而且可溶于水、易在用水冲洗时被除去。所以通常用负染色法染色，使菌体和背景着色，而荚膜不着色，在菌体周围形成一透明圈。由于荚膜含水量高，制片时通常不用热固定，以免变形影响观察。?1、实验材料?①荚膜染色液。?②菌种。有荚膜的细菌。?③其他。玻片、接种环、吸管等。2、注意事项?①荚膜染色涂片不要用加热固定，以免荚膜皱缩变形。?②玻片必须洁净无油迹，以免涂片时混合液不能均匀散开。? ;实验内容（了解鞭毛染色的方法和步骤）;鞭毛是细菌的运动“器官”，细菌是否具有鞭毛，以及鞭毛的数目和附着于细菌的位置是细菌的一项重要形态特征。细菌的鞭毛很纤细。除了很少数形成鞭毛束（由许多根鞭毛构成）的细菌可以用相差显微镜直接观察到鞭毛的存在外，多数细菌的鞭毛均不能用光学显微镜直接观察到。要用普通光学显微镜观察细菌的鞭毛，必须用鞭毛染色法。?????鞭毛染色的基本原理是在染色前先用媒染剂处理，使它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。?1、实验材料?①鞭毛染色液。 ?②菌种。有鞭毛的细菌。 ?③其他。玻片、接种环、吸管等。2、注意事项?①良好的培养物是鞭毛染色成功的基本条件，不宜用陈旧培养物作鞭毛染色的菌种材料，因为老龄细菌鞭毛容易脱落。 ?②玻片应光滑、洁净，不可带油迹。不洁净的载玻片可经含适量洗衣粉的水中煮沸约20min，取出后用清水充分洗净，沥干水后置95%酒精中处理，用时取出在火焰上烧去酒精及可能残留的油迹。? ③挑取菌时，尽可能不带培养基。 ?④配制