新生儿溶血病检测卡标准操作程序(SOP).docVIP

长春博迅生物技术有限责任公司 新生儿溶血病检测卡标准操作程序（SOP） 准备工作 （一）微柱凝胶试剂卡的准备：观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡放置室温（18－25℃）平衡，再用专用离心机离心5分钟。 (二)试剂的制备：6%牛血清白蛋白（盐水稀释） （三）标本采集：采集被检对象静脉血，将该同一人血液分别制备成红细胞标本和血清标本。 （四）红细胞标本的制备：用红细胞稀释液配制红细胞悬液，红细胞最终浓度为0.8%－1％。 （五）血清标本的制备：将被检者静脉血采入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中，10分钟后离心，取上清；或者将被检者静脉血采入无抗凝剂试管中，4℃放置12小时，或37℃放置2小时后离心，2000rpm，10分钟，取上清。该上清不得有絮状物或沉淀。 （六）放散试验：1、充分洗涤红细胞至少三次，取同体积洗涤后的压积血和6%牛血清白蛋白混匀，置于56℃孵育10分钟，期间不断摇动，离心1000rpm，2－3分钟，取上清。即放散液。 2、充分洗涤红细胞至少三次，用博讯公司生产的酸性放散试剂盒做室温放散。参见酸性放散试剂盒使用说明书。 二、 实验步骤 1、取新生儿的红细胞0.8%－1％悬液50ul分别加入卡1中的1－6孔中。 2、使用专用离心机离心5分钟，900rpm 2分钟，1500 rpm 3分钟。 3、取出，判读结果。 4、第二卡1－3孔分别加入50ul新生儿血清，4－6孔分别加入50ul新生儿红细胞放散液。 5、将A型红细胞悬液50ul分别加入1号、4号；将B型红细胞悬液50ul分别加入2号、5号；将O型红细胞悬液50ul分别加入3号6号孔中。 6、37℃孵育15分钟。 7、取出，使用专用离心机离心5分钟（900rpm2分钟，1500 rpm3分钟），取出，判读结果。 结果判定 阳性结果：红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中。表明被检者血清中含有对应其抗原的抗体或血细胞被致敏。 阴性结果：红细胞完全沉降到凝胶底部，在凝胶管底部形成红细胞扣。表明血清中无相应抗原免疫的抗体或血细胞没有被致敏。 反应强度：特异性红细胞抗原抗体复合物位于胶表面，为强阳性反应；复合物在胶中为弱阳性反应；愈靠近胶底部颗粒愈小，反应愈弱（2+或1+）。 三、注意事项 1、红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。尽可能应用当日采集的新鲜血做本实验。 2、血清标本：血清标本必须充分去除纤维蛋白，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出，阻碍红细胞沉淀，呈假阳性反应。 3、如在微柱凝胶中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所致溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员多报告并讨论。 4、父亲红细胞标本也可用与其同型的A型或B型红细胞代替。 5．洗出尽量多红细胞进行放散；注意放散的温度不可超过56℃，以防溶血；天冷时放散液注意保温；尽可能多得放散液吸出；注意出去放散液中残留的红细胞；放散前红细胞要充分洗涤，至少三次。 6、每日试验前，先取出微柱凝胶卡放置至室温。 7、红细胞悬液的浓度控制在0.8%－1％之间。 8、试剂卡应放在18-25℃储存，如若长期放在4℃冰箱，建议每1-2个月取出，用专用离心机离心一次，以防止干胶或产生气泡。