专题1《基因工程》概述.ppt

专题一 基因工程;１. 基因工程的概念;一、基因工程的基本操作工具;识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。;G A A T T C;什么叫平末端？;……GAATTC…… ……CTTAAG……;一G↓GATCC一 一CCTAG G一;基因工程疑难问题的解读：;同裂酶（Isoschizomers） 有些来源不同的限制酶却识别和切割相同的序列，这类限制酶称为同裂酶。同裂酶产生同样切割，形成同样的末端，酶切后所得到的DNA片段经连接后所形成重组序列，仍可能被原来的限制酶所切割。同裂酶之间的性质有所不同（如对离子强度、反应温度以及对甲基化碱基的敏感性等方面可能有所差别）。 　　同尾酶(Isocaudomers) 有些来源不同的限制酶，识别及切割序列各不相同，但却能产生出相同的粘性末端，这类限制酶称为同尾酶。但两种同尾酶切割形成的DNA片段经??接后所形成的重组序列，不能被原来的限制酶所识别和切割。EcoRI 和MunI属于同尾酶。;“分子缝合针” —ＤＮＡ连接酶 ;E·coliDNA连接酶：连接黏性末端;DNA连接酶;;; “分子运输车” —载体; 提醒　①一般来说，天然载体往往不能满足人类的所有要求，因此人们根据不同的目的和需要，对某些天然的载体进行人工改造。 ②常见的标记基因有抗生素抗性基因、产生特定颜色的表达产物基因、发光基因等。 ③作为载体必须具有一个至多个限制酶切点，而且每种酶的切点最好只有一个。因为某种限制酶只能识别单一切点，若载体上有一个以上的酶切点，则切割重组后可能丢失某些片段，若丢失的片段含复制起点区，则进入受体细胞后便不能自主复制。一个载体若只有某种限制酶的一个切点，则酶切后既能把环打开接纳外源DNA片段，又不会丢失自己的片段。 ④注意与细胞膜上载体的区别，两者的化学本质和作用都不相同。 ⑤质粒能自我复制，既可在自身细胞、受体细胞内，也可在体外。 ;1、下列关于限制酶的说法正确的是（ ） A、限制酶广泛存在于各种生物中，但微生物中很少 B、一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 C、不同的限制酶切割DNA后都会形成黏性末端 D、限制酶的作用部位是特定核苷酸形成的氢键;3.右图为DNA分子结构示意图，对该图的正确描述是 A．④的名称是胞嘧啶脱氧核苷酸 B．解旋酶作用的部位是⑨ C．某限制性核酸内切酶可选择⑨处作为切点 D．DNA连接酶可连接⑩处断裂的化学键;4．下图为DNA分子在不同酶的作用下所发生的变化，图中依次表示限制性核酸内切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、解旋酶作用的正确顺序是 (　　);5．可以用于重组DNA技术的酶是(多选) A．DNA聚合酶 B．限制性核酸 C．DNA连接酶 D．反转录酶;6．下列有关限制性内切酶识别的叙述，不正确的是: A．从反应类型来看，限制性内切酶催化的是一种水解反应 B．限制性内切酶的活性受温度、pH的影响 C．一种限制性内切酶只能识别双链DNA中某种特定的脱氧核苷酸序列 D．限制性内切酶识别序列越短，则该序列在DNA中出现的几率就越小;解析：染色体由DNA和蛋白质构成；原核生物没有染色体；质粒可以做为基因工程的 载体，而染色体不行。;9、限制酶是一种核酸切割酶，可辨识并切割DNA分子上特定的核苷酸碱基序列。下图为四种限制酶BamHI，EcoRI，HindⅢ以及BglⅡ的辨识序列。箭头表示每一种限制酶的特定切割部位，其中哪两种限制酶所切割出来的DNA片段末端可以互补黏合？其正确的末端互补序列为何？ ;10、用DNA连接酶把被限制酶Ⅰ（识别序列和切点是---↓GATC---）切割后的质粒和被限制酶Ⅱ（识别序列和切点是---G↓GATCC---）切割过的目的基因连接起来形成重组质粒，该重组质粒能够被限制酶Ⅱ完全切割开的概率是（ ） A. 1/4 B.1/16 C. 7/16 D.3/4;11、用限制酶E将长度为5.0kbp（千碱基对）的质粒的一处切断；接着用限制酶E切割某一DNA分子得长度为1.5kbp的目的基因；再用DNA连接酶连接成重组质粒，扩增。现用限制酶B、E、H对克隆的重组质粒进行切割，电泳分离的结果如图。则用限制酶B和限制酶H共同完成切割一个重组质粒，预计产生的片段长度（kbp）可能是（多选） A.2.0、3.0、1.0和0.5 B.2.0、3.0、0.5、0.5和0.5