无菌观念技术.docVIP

[实验目的] 建立无菌观念；学习无菌操作技术；认识环境中微生物无处不在；认识紫外线杀菌的应用范围和局限性。 ? [实验原理] 在人体皮肤上存在着暂存细菌和常存细菌。用肥皂水刷洗，能清除皮肤表面的暂存细菌，但对皮肤常存细菌的清除必须继以酒精浸泡等。无论是采用消毒液浸泡或涂擦，位于皮肤深处的常存细菌不能完全被清除消灭。手洗净后，一定要用干净的个人专用毛巾、手绢或一次性消毒纸巾擦干双手，并勤换毛巾。另外，让湿手自动“晾干”，也是一种好办法。 一般在室内空气中的细菌总数远高于室外空气，不同用途的建筑物室内和不同人口密度的 室内，空气中细菌的数量相差很大。 紫外线在波长为200nm-300nm范围最具杀菌效能。尤其在波长为250-260nm 时紫外线的杀菌作用最强。紫外线杀菌原理是通过紫外线对微生物的照射，以改变及破坏 微生物的组织结构（DNA-核酸），导致核酸结构突变，生物体丧失复制、繁殖能力，导致生物变异或死亡。但紫外线杀菌也要有一定持续时间。紫外线穿透力较弱，普通玻璃、纸张、尘埃、水蒸汽等均能阻挡紫外线，一般用于手术室、病房、实验室的空气消毒。紫外线可损伤皮肤和角膜，应注意防护。另外，有些病毒，如脊髓灰质炎病毒经紫外线灭活后，再用可见光照射后，可因除去双聚体而复活，称为光复活，故不宜使用紫外线来制备灭活疫苗。 ? ? [实验材料] 1．菌种：表皮葡萄球菌及大肠埃希菌18-24h琼脂平板培养物。 2．器材：琼脂培养基、肥皂、擦手巾、紫外光灯、恒温培养箱、接种环。 ? ? [实验步骤] 1、空气组：将菌种在空气中分别暴露5min, 10min,15min ,20min，倒置放入恒温培养箱 2、UV组：用接种环挑大肠杆菌少量在培养基上培养。一边盖上盖，一边不盖。正放，放入紫外线照射机中。分别放置5min,10min,15min,20min. 3、皮肤组：将培养皿平分为上下左右四个区，分别作如下实验： I区： 手指直接在琼脂培养基上按手印 II区：手用自来水洗，不擦干，也不自然甩干，在琼脂培养基上按手印 III区：手用肥皂和自来水冲洗，不擦干，也不自然甩干，在琼脂培养基上按手印 IV区：手用肥皂和自来水冲洗，用擦手巾擦干，在琼脂培养基上按手印 将此操作后的琼脂培养基放入恒温培养箱。 4、自由实验：人身体上各处的细菌。 ?? 将培养皿平分为上下左右四个区，分别作如下实验： I区：取人体鼻翼细胞 II区：取人体头皮的细菌 III区：取人体口腔的细菌 IV区：取人体嘴角细胞 将此操作后的琼脂培养基放入恒温培养箱。 ? ? [注意事项] 1．作时间横向对比（如5min,10min,15min,20min…）的各项培养基应尽量保证其他产菌条件相同。如空气组，尽量要保证不同时间的培养皿放在人口密度，通风条件相同的环境。又如，UV组应尽量保证取菌量相同，被玻璃遮盖处的面积相同。再如，皮肤组II区、III区的实验进行时，实验者在按手印时手的湿度应当是相近的。2．试验中，要灼烧接种环，取菌、接种和培养时都要尽量避免引入杂菌。 3．一般最好将培养皿培养24h后观察。 [临床意义] 无菌技术是医疗、护理操作中预防和控制交叉感染及传播的一项重要基本操作。在无菌操作 过程中，任何一个环节都不得违反操作原则，否则就可能造成交叉感染的机会，给病人带来 不应有的痛苦和危害。因此，必须加强无菌观念，准确熟练地掌握无菌技术，严格遵守无菌技术规范。 ? [实验结果与分析] 1、四天后，将培养皿从恒温培养箱中取出，观察。 绘图如下（以20min组为例）： ? ???图一 空气组????????? ?????????????????????????图二：UV组 I区??????? II区?I区II区III区??????? IV区III区??????? IV区图三 皮肤组??????????????????????? ???????????图四：自由实验 ? 从实验结果可以看出： UV组：在有玻璃覆盖的一边，仍有细菌生长，形成菌苔。而在UV直射的一边，只有不到十个菌落。可见1）紫外线穿透力较弱，玻璃既可挡住2）紫外线杀菌也要有一定持续时间，20min还不足以杀灭全部细菌。 皮肤组：不洗手杀菌效果最差，洗手、用肥皂且擦手效果最好。这可能是因为实验中用的擦手巾是消毒过的。而湿手因为潮湿较易黏附空气中的细菌。因此，应正确洗手，擦手。 自由组：口腔中的细菌最多。口腔中存在一个庞大的正常菌群以帮助消化，这些菌群与人体的免疫力呈平衡态。但如果不注意口腔卫生或意外口腔破损，菌群失调，就有可能发生内源性感染。 2、不同时间组（5min、10min、15min、20min）之间的菌落计数对比 时间/min51015202530空气组/菌落数