第2章 生产菌种的选育.ppt

第二章 生产菌种的选育培养Microbial breeding and cell cultivation; 有些微生物能在厌氧的条件下生长； 有些微生物能够利用简单的有机物和无机物满足自身的生长； 有些微生物能进行复杂的代谢； 有些微生物能利用较复杂的化合物； 有些微生物能在极端的环境下生长。 ;一、微生物代谢产物;1、微生物合成次级代谢产物的基本特征;(1)次级代谢产物具有种特异性;(2)分批发酵时，产生菌生长周期三个时期;(3) 次级代谢产物不少是结构相似的混合物;原因 ;;;(4)次级代谢产物的合成受多基因控制;初级代谢与次级代谢都受到核内遗传物质的控制，而在许多抗生素产生茵如天蓝色链霉菌、金霉素链霉菌、灰色链霉菌、龟裂链霉菌、卡那霉素链霉菌等中发现，抗生素的合成同时受到核外遗传物质--质粒的控制，因此，有人将受到质粒控制的代谢产物称为“质粒产物”。 ;1、次级代谢产物??建单位的生源说和生物合成;特殊前体;作为链的延长单位有丙二酰CoA、甲基丙二酰CoA、乙基丙二酰CoA等。是C2、C3和C4的供体;?-聚酮体链－连续而完全的还原反应获得脂肪酸； 不完全的还原或还原位点的不同可获得变化范围广泛的聚酮体。 经过重复脱水常得到芳香化合物(如四环类、蒽环类抗生素) 经过环化作用形成大内酯环(大环内酯类抗生素)，如果形成多个双键的环状化合物，就可能导致多烯大环内酯类抗生素的合成。;; (三)糖类和氨基糖;;(四)不常见的氨基酸;(五)环多醇和氨基环多醇;比较源自D-葡萄糖的链霉胍，2-脱氧链霉胺和Actinamine的标记模式; (六)非核酸的嘌呤碱和嘧啶碱的生物合成;次级代谢产物生物合成的基本过程;;（二）次级代谢产物的最终修饰;二、微生物代谢的调节及控制;反馈抑制模式 --协同反馈抑制;;;反馈抑制模式 --顺序反馈抑制 ;2、酶合成的调节---诱导与阻遏;3、能荷调节;;（二）氨基酸生产有关的微生物;（三）食品酶制剂生产有关的微生物;工业化菌种的要求;二、新菌种的分离(separation)与筛选(sereeing);;一）采样时要注意的问题;富集的三种方案：;定向培养的富集方法;案例分析—工业乳酸发酵的菌种选育;乳酸菌菌株;有希望的菌株;菌种分离的一般过程;三、菌种改良及工程菌构建;第三节 微生物代谢控制育种的措施;2、次级代谢产物高产菌株的筛选;;渗漏缺陷型(leaky mutant)?;二、抗反馈抑制突变株;三、其他类型的突变株;工业菌种改良方法;;第四节 菌种的扩大培养及保藏;种子扩培的目的;菌种扩大培养的基本过程;1）实验室阶段; 获得一定数量和质量的孢子;2）培养基选择的原则;3）起始接种物的传代问题;（二）生产车间种子制备;（2）培养基选择的原则;（3）种龄;（4）发酵级数的确定;发酵级数确定的依据;（5）接种量的确定;1．细胞或菌体 菌体形态、菌体浓度以及培养液的外观，是种子质量的重要指标。 2．生化指标 种子液的糖、氮、磷含量的变化和pH值变化是菌生长繁殖、物质代谢的反映。 3．产物生成量 种子液中产物的生成量是多种抗生素发酵考察种子质量的重要指标。 4．酶活力 土霉素生产的种子液中测定淀粉酶活力 。;二、菌种的衰退与复壮;理想的菌种保藏方法应具备的条件;1、斜面保藏法和穿刺保藏法 2、石蜡油封存法 3、沙土管 4、麸皮保藏法 5、冷冻干燥 6、液氮低温保藏 7、其他方法 ;低温保藏种类 ;冻存保护剂是指可以保护细胞免受冷冻损伤的物质（常为溶液）。 细胞悬液中加入冷冻保护剂可保护细胞免受溶液损伤和冰晶损伤。冷冻保护剂同溶液中的水分子结合，发生水合作用，弱化水的结晶过程使溶液的粘性增加从而减少冰晶的形成，同时冷冻保护剂可以通过在细胞内外维持一定的摩尔浓度，降低细胞内外未结冰溶液中电解质的浓度，使细胞免受溶质的损伤。 ;冷冻保护剂根据其是否穿透细胞膜可分为渗透性和非渗透性两类。 冰晶损伤：因细胞内部结冰而导致的细胞损伤； 溶液损伤：因保存溶液中溶质浓度升高而导致的细胞损伤； 渗透性冷冻保护剂：可以渗透到细胞内，一般是一些小分子物质，主要包括甘油、DMSO、乙二醇、丙二醇、乙酰胺、甲醇等； 非渗透性冷冻保护剂：不能渗透到细胞内，一般是写大分子物质，主要包括聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、蔗糖、聚乙二醇、葡聚糖、白蛋白以及羟乙基淀粉等。 ;1、 普通冷冻保藏技术(-20℃);应注意的是经过一次解冻的菌株培养物不宜再用来保藏。 保藏过程中应注意控制保藏温度，培养瓶或试管应严格密封。 这一方法虽简便易行，但不适宜多数微生物的长期保藏。 ;2、 超低温冷冻保藏技术(-60 ~