基因工程概论期末考试.docVIP

名词解释 20’ 基因工程 基因工程是指重组DNA技术的产业化设计与应用，包括上游技术和下游技术两大组成部分。上游技术指的是基因重组、克隆和表达的设计与构建（即重组DNA技术）；而下游技术则涉及到基因工程菌或细胞的大规模培养以及基因产物的分离纯化过程。 基因表达 是指细胞在生命过程中，把储存在DNA顺序中遗传信息经转录和翻译，转变成具有生物活性的蛋白质分子 限制性核酸内切酶 能特异性识别双链DNA某段特殊序列，并切割DNA双链的酶，主要存在于原核细菌中主要作用是保护自身DNA不受限制及破坏外源DNA使之迅速降解 重组率重组率 含有外源DNA的重组分子数 / 载体分子总数 在常规实验条件下，重组率一般为25-75%；重组率是衡量连接反应效率的重要指标，较高的重组率可以大大简化DNA重组的后续操作 探针 一小段单链DNA或RNA片段，用于检测与其互补的核酸序列，双链DNA加热变性成为单链，随后用放射性同位素 P-32常用 、荧光燃料或酶标记成为探针 1 U DNA连接酶的酶活性 在最佳反应条件下15 ℃反应完全连接 1 mg l-DNA（Hind III片段）所需的酶量 选择题 重组乙肝疫苗是 由重组酵母或重组CHO工程细胞表达的乙型肝炎表面抗原，经纯化、灭活及加入佐剂吸附制成。前者为重组酵母乙型肝炎疫苗，后者为重组CHO乙型肝炎疫苗 基因工程用于药物筛选模型的战略 控制质粒拷贝数的意义是使外源蛋白在细胞内更稳定 酵母作为受体，比大肠杆菌的优势在于 大肠原核 酵母真核，具有多种细胞器，在用于生产需加工分泌的蛋白质时比大肠杆菌有优势 分子杂交的化学本质是形成氢键 PCR定点突变DNA的方法是 碱基的添加、删除、点突变 双链DNA切开后，两链末端基团是5-磷酸基和3-羟基的末端 限制性核酸内切酶缓冲液中，DTT的功能是 还原，抗氧化。保护酶分子上的还原性基团，维持还原性环境，稳定酶活 DNA连接反应的最佳温度是 聚乙二醇促进平头DNA分子连接的机理 促进DNA分子凝聚成聚集体的物质以提高转化效率 大肠杆菌DNA聚合酶的用途 细胞复制DNA的重要作用酶 Klenow酶：又称Klenow片段，用枯草杆菌蛋白酶将DNA聚合酶I裂解为36kD和76kD两个片段，大片段称为Klenow片段 T4DNA聚合酶的用途是 它无5→3 外切酶活性 它需一条有引物的单链DNA作模板 它利用单链DNA为模板进，可同时利用它作为引物，即此单链DNA的3端能环绕其本身的某一顺序形成氢键配对，3端的未杂交部分即被T4DNA聚合酶的3→5外切酶活性切去，然后在其作用下从3-OH端开始聚合，合成该模板DNA的互补链，再以互补链为模板合成原来的单链DNA。 碱性磷酸单酯酶的用途是切平由核酸内切酶产生的3’粘性末端 质粒是一种 附加到细胞中的非细胞的染色体或核区DNA原有的能够自主复制的较小的DNA分子（即细胞附殖粒、又胞附殖粒）。 转化子扩增的主要目的是 增殖转化细胞，使得有足够数量的转化细胞用于筛选程序 扩增和表达载体分子上的标记基因，便于筛选 表达外源基因，便于筛选和鉴定 PIJ质粒含有tsr，me’，外源DNA应克隆于 DNA重组中，筛选的任务是，转化扩增后，____ puc18上，lac z编码产物可让无色X-gal变成蓝色 限制性酶切图谱法可用于区分重组子与非重组子 菌落原位杂交、克隆菌的裂解与重组DNA分子的变性是由于____而引起的 放射免疫原位杂交法快速筛选目的重组子的工作原理是特异性检测目的基因表达的____ 鸟枪法首先能识别切割_____序列的酶部分消化染色体DNA 伯格霉素最好选用____受体 cDNA第一链合成过程叫____，cDNA差向分离中要涉及____ PCR反应的必要条件是____ 反应体系应加入模板DNATaq 酶一对引物dNTP或缓冲液 很多大肠杆菌中表达的人蛋白编码基因为何多用人工合成？工作量更小 载体一般具有在受体细胞中____ 至少有一个复制起点有克隆位点具备转化的功能遗传标记基因具有较高的载装能力 有T7启动子的载体需要大肠杆菌的株 细胞分离质粒纯度最高的程序是____ 体外包装的重组λ噬菌体转染大肠杆菌时，为何加麦芽糖？ 插入型λDNA的特点是____ λDNA为何一般不用于表达目的基因？ 1 分子量大， 2 酶的多切点， 3 无选择标记 M13噬菌体DNA载体的特征是____ 考斯质粒上，cos区功能是____ Ap’与lacZ+，受体基因的遗传表型应为____ 同黏性末端，外源DNA片段的极性 BamHI与BgIII互为同尾酶，若外源DNA片段两端均为BamHI末端，而载体用BgIII切开，则： NarI 5’-GG’CGCC-3’ 切开的DNA用Klenow处理，另一段经HgiAI 5’-GTGCA’C