DNA的复制和修复重点.ppt

第三讲 DNA的复制与修复;第一节 DNA的复制; ;证实半保留复制的实验;二、 边解链边复制;图 3 – 3 在复制不同阶段的DNA分子;图 3 – 4 在非复制DNA的旁边复制的DNA被看成是复制眼;;图3 – 5 放射活性标记的不同密度可被用于区别不定向和双向复制;图3-6 复制可能是不定向或双向的，这决定于在起始点形成1或2个复制叉。;表 2-9 部分生物复制子的比较; 1. 线性双链;图3-7 真核生物DNA的双向复制; 滚环复制的电镜照片;图3 – 7 滚动循环产生一个多聚单链尾巴。;图3 – 8 滚动循环可用于不同的目的，这依赖于移出尾巴的命运……;图3 – 9 φX174RF是一个合成单链病毒圆环的模板……;图3 –10 D环复制;四、半不连续复制;图3-11 半不连续DNA复制的实验证明;半不连续复制;五、DNA复制过程; Helicase，任何DNA在被复制前都必须解开双链，这个过程是由helicase来完成的，它可在ATP的作用下??DNA母链不断解开形成单链。Topoisomerase，主要功能是消除DNA解链过程中所产生的扭曲力。DNA结合蛋白，使新解链的DNA保持稳定结构。Primases，为DNA复制提供RNA引物。DNA polymerases，合成新生DNA链，切除RNA引物。DNA Ligases，使新生DNA链上的缺口（3-OH, 5-p）生成磷酸二酯键。;（1）DNA聚合酶;;DNA聚合酶III： 是DNA复制的主酶。 （a） 5′→3′ 聚合酶活性：是DNA聚合酶I的15倍， DNA聚合酶II的30倍。 （b）3′→5′外切酶活性 它能在引物羟基上以每分钟约5万个核苷酸的速率延长新生的DNA链，是大肠杆菌DNA复制中链延长反应的主导聚合酶。;图3 – 12 在若干阶段，DNApol Ⅲ 全酶被装配，产生一个酶复合体，它合成两个新链的DNA。;;（2）引物酶及引发体; （c） 引发体（primosome);（3） DNA链解旋，解链的酶和蛋白;（4） 拓扑异构酶（topoisomerase);图3 – 13 I型拓扑异构酶作用机理示意图;（5） 连接酶（ligase);2、大肠杆菌DNA复制;(续表）;复制起始的主要步骤;;（2）DNA子链的延伸;;3. DNA链的终止 ??? 当子链延伸达到terminus region（ter，带有多个20bp序列）时，DNA复制就终止了。Ter有点像一个陷井（trap），使复制叉只能进入，不能出来。Ter的功能主要是由Ter-Tus复合物（ter utilization substance）来完成的。;;;4. 真核细胞DNA复制的特点;表2-11 真核生物DNA聚合酶的特性比较;七、DNA复制的调控;2.真核细胞DNA的复制调控;第二节 DNA的损伤修复;错 配 修 复;;;2. 碱基切除修复（Base-Excision Repair） ??? DNA gylcosylases能特异性识别常见的DNA损伤（如胞嘧啶或腺嘌呤去氨酰化产物）并将受损害碱基切除。去掉碱基后的核苷酸被称为AP位点（apurinic or apyrimidinic）。细胞中最常见的Uracil Glycosylase就能特异性切除细胞中的去氨基胞嘧啶。;碱基切除修复;3. 核苷酸切除修复（nucleotide-excision repair） ??? 当DNA链上相应位置的核苷酸发生损伤，导致双链之间无法形成氢键，由核苷酸切除修复系统负责进行修复。;核苷酸切除修复;5;4.DNA的直接修复（Direct repair） ;;O6-甲基鸟嘌呤核苷酸的形成可引起G-T错配。;;重 组 修 复;第三节 DNA的转座;1.转座子的分类和结构特征;;; b.复合式转座子（composite transposon） 是一类带有某些抗药性基因（或其他宿主基因）的转座子，其两翼往往是两个相同或高度同源的IS序列，表明IS序列插入到某个功能基因两端时就可能产生复合转座子。 一旦形成复合转座子，IS序列就不能再单独移动，因为它们的功能被修饰了，只能作为复合体移动。;;;没有IS序???的、体积庞大的转座子（5000bp以上）——TnA家族。 这类转座子带有3个基因，其中1个是β－内酰胺酶（AmpR），另外两个则是转座必需的。;2.真核生物中的转座子;a. Ac-Ds系统;ORF1;（2）果蝇的转座子——P转座子;6.6×104;3、转座作用的机制 ? 转座时发生的插入作用有一个普遍的