SOD提取纯化.docVIP

动物血中超氧化物歧化酶的提取与纯化 一、超氧化物歧化酶的提取 [原理] l969年，McCord和Fridovich第一次从牛血中提纯到超氧化物岐化酶。自然界中SOD分布极广，其含量随生物体的不同而不同，即使同一种生物的不同组织或同一组织的不同部位，其SOD的种类和含量也有很大差别。迄今为止人们已从细菌，真菌、原生动物。藻类、昆虫、鱼类、植物和动物等各种生物体内分离得到SOD。为拓宽提取SOD的原料，筛选或基因过程开发产SOD量较高的菌株。目前，研究开发最多的资源还是从动物血液、动物组织中制备提纯SOD。 从动物血液材料中制备Cu Zn-SOD纯化工艺分为三个主要步骤： （1）原材料的预处理； （2）粗酶液的制备； （3）离子交换柱层析精制。 国内多采用Mccord和Fridovich法，其主要工艺过程为： 第一步，乙醇-氯仿除去血红蛋白； 第二步，有机溶剂和硫酸铵分级沉淀； 第三步，离子交换柱层析精制。 [试剂和器材] 1、试剂 3.8%（质量分数）柠檬酸三钠；0.9%（质量分数）氯化钠 ；95%（体积分数）乙醇；氯仿；丙酮 ；pH7.6、2.5mmol/L K2HPO4-KH2PO4缓冲液 ；DEAE-Sephadex A-50 2、器材 猪血；恒温水浴