微柱阵列型拓扑结构对细胞通道功能响应性的影响.docVIP

摘 要 制备了微柱名义直径为4 μm或10 μm，名义间距为 4 μm或 7 μm，名义高度为4 μm 的聚二甲基硅氧烷微柱阵列型拓扑结构基底，研究了 HepG2细胞与拓扑结构基底复合后细胞瞬时受体电位通道TRPV1、 TRPV4在基因和蛋白水平的表达及其功能响应性。细胞TRPV1和TRPV4在基因水平表达的评价采用定量 PCR技术进行；TRPV1和TRPV4在蛋白水平的表达以免疫印迹和免疫荧光染色确认；TRPV1和TRPV4功能响应性的研究系以TRPV1和TRPV4激动剂辣椒素和4α-佛波醇-12, 13-二葵酸酯刺激细胞，采用钙离子染料钙绿-1结合激光共聚焦显微技术记录钙内流动态过程，以钙内流荧光响应幅度及阳性响应比率进行评价。 四种拓扑结构基底上细胞 TRPV1和TRPV4的 mRNA表达量均显著高于平面基底上相应值。相同微柱间距(4 μm、7 μm)，较大微柱直径(10μm)的基底促进细胞铺展，同时伴随着较高的TRPV1或TRPV4基因表达水平；相同微柱直径(4 μm或10 μm)，较小微柱间距(4μm)的基底一定程度促进细胞铺展，但却伴随着较低的TRPV1或TRPV4基因表达水平。免疫印迹实验证实了TRPV1和TRPV4在蛋白水平的表达，且拓扑结构基底上TRPV1和TRPV4免疫荧光染色强度较之平面基底相应值明显增高或趋于增高。在激动剂作用下，TRPV1介导的钙