新转基因动物-2012-分析.ppt

转基因动物 2012年12月 主要内容 基本概念 转基因动物的命名 目前制作转基因动物的主要方法 转基因动物研究的意义及应用 随着现代高新科学技术的发展，现代实验动物学已从过去注重于动物饲养管理和实验操作的宏观向微观方向发展。 对小鼠基因组研究的目的不仅在于了解小鼠本身的基因结构，更主要的是为人类基因组研究、人类遗传疾病研究提供动物模型。 一、基本概念 转基因动物（Transgenic animal） :是指以实验方法导入的外源基因在其染色体基因组内稳定整合并能遗传给后代的一类动物。 外源基因随细胞分裂分配到所有子细胞中并遗传给后代 严格说，转基因动物有别于嵌合体。 基本原理: 目的基因或基因组片段 受精卵或着床前胚胎细胞 受体动物的输卵管或子宫中 携带有外源基因的转基因动物 转基因动物技术发展的四个阶段 第一，实现外源基因的导入（随机整合） 第二，实现导入的外源基因定点整合（同源重组，基因打靶技术） 第三，实现导入的外源基因的组织特异性表达（借助于一系列组织特异性启动子的应用） 第四，实现导入的外源基因的时间特异性表达（应用Cre/loxP重组酶系统） 二、命 名 1．符号 1 一个转基因符号由以下三部分组成： TgX YYYYYY ＃＃＃＃＃ Zzz， TgX 方式； YYYYYY 插入片段标示； ＃＃＃＃＃ 实验室指定序号； Zzz 实验室注册代号； 2 方式—TgX 转基因符号通常冠以Tg字头。 随后的一个字母X，表示DNA插入的方式： H 代表同源重组； R 代表经过逆转录病毒载体感染的插入； N 代表非同源插入。 （3）插入片段标示— YYYYYY 是由研究者确定的表明插入基因显著特征的符号。 通常由放在圆括号内的字符组成：可以是字母（大写或小写），也可由字母与数字组合而成，不用斜体字，上下标、空格及标点等符号。 应注意以下几点： 1）标示应简短，一般不超过六个字符。 2）如果插入序列源于已经命名的基因，应尽量在插入标示中使用基因的标准命名或缩写，但基因符号中的连字符应省去。 3）插入片段标示只表示插入的序列，并不表明其插入的位置或表型。 一些标示的标准命名缩写： An 匿名序列； Ge 基因组； Im 插入突变； Nc 非编码序列； Rp 报告基因； Sn 合成序列； Et 增强子捕获装置； Pt 启动子捕获装置。 （4）实验室指定序号及实验室注册代号 实验室指定序号：是由实验室对已成功的转基因系给予的特定编号，最多不超过5位数字。而且，插入片段标示的字符与实验室指定序号的数字位数之和不能超过11。 实验室注册代号：是对从事转基因动物研究生产的实验室给予的特定符号。 2.举例 C57BL/6J-TgN CD8Ge 23 Jwg： 来源于美国杰克逊实验室（J）的C57BL/6品系小鼠被转入人的CD8基因组（Ge）；转基因在Jon W.Gordon Jwg 实验室完成，获取于一系列显微注射后得到的序号为23的小鼠。 转基因符号缩写: C57BL6J-TgN23Jwg TgN GPDHIm 1Bir 以人的甘油磷酸脱氢酶基因（GPDH）插入（C57BL/6J X SJL/J）F1代雌鼠的受精卵中，并引起插入突变（Im），这是Edward H.Birkenmeier Bir 实验室命名的第一只转基因小鼠。 根据转基因动物命名原则，如果转基因动物的遗传背景由不同近交系或远交群混合而成时，该转基因符号不使用动物品系或种群的名称。 缩写： TgN1Bir 三、遗传修饰动物模型的建立方法 1、转基因技术：目的基因 整合 受精卵（或胚胎干细胞） 导入 受体子宫 发育成含目的基因的个体，此个体能把目的基因遗传下去。 2、核移植技术:又称动物整体克隆技术。将一个体细胞的核导入另一个体的去核卵细胞中，使之发育成个体。 3、基因剔除技术：又称基因靶向灭活。指有目的地去除动物体内某种基因的技术。基本原理是同源重组技术。 导入基因的主要方式 显微注射法 ES细胞法 电穿孔 脂质体 逆转录病毒感染法 精子载体导入法等 （一）雄原核显微注射法 以单细胞受精卵为靶细胞，利用显微注射技术将构建好的载体DNA直接注射入受精卵的原核，再将接受注射的受精卵移入假孕母体输卵管继续发育获得转基因动物个体。 目前应用较广泛，最早最经典的方法。 一、设计转基因构件 1、目的基因的获取 2、基因载体（复制子）的选择与构建 3、目的基因与载体的连接（连接酶）：重组DNA 分子 二、动物操作 1、准备假孕母鼠（养母） 2、受精卵的准备 3、基因导入 4、胚胎移植 5、对幼鼠的鉴定 转基因工作需要的动物 1、需要的野生型小鼠类型包括： 幼龄雌鼠（21-28天）用