小猪蓝白斑3技术分析.pptVIP

* * 阳性重组子的筛选 ------蓝白斑筛选法 （α互补的原理） 杭州英特外国语学校 林奕含 思考题： 一群不会游泳的小猪滑落在游泳池里，会有什么后果呢？ 有一群大肠杆菌，我们暂且叫它们“小猪”吧 普通大肠杆菌对青霉素敏感，在含有青霉素的培养基中，它们不能生长。 B 就像是捡到救生圈的小猪!!! 普通大肠杆菌对青霉素敏感 质粒DNA上有氨苄青霉素抗性基因 在不含青霉素的培养基中生长 Ligation Recombinant plasmid DNA 重组过程示意 Transformation 大肠杆菌 （比如：人的聪明基因） 双酶切质粒，取大片段 如何区分B和C？ 它们都携带氨苄抗性基因 如何筛选含有携带外源基因的细胞？ 蓝白斑筛选法是一种常用的方法 β-半乳糖苷酶 (β- galacosidase) 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷 X-gal(无色） 深蓝色的5-溴-4-靛蓝 和 半乳糖 β肽 α肽 β-半乳糖苷酶 α肽由质粒DNA中LacZ基因编码 β肽由染色体DNA编码 外源基因插入之后，LacZ基因被破坏。不能形成α肽。 α肽 β肽 X-gal ? 无蓝色产物合成 白斑 蓝斑 白斑 蓝白斑实例 β-半乳糖苷酶由α肽和β肽两个亚基组成，分别由质粒DNA和染色体DNA编码。可将无色的X-gal催化成蓝色的产物。 当外源基因重组至质粒载体中，编码α肽的LacZ基因被破坏，因而没有半乳糖苷酶活性，为白斑。无外源基因的菌株为蓝斑。 α互补的原理（书面版总结） 名词解释： α互补 问题1： 为什么还会有蓝斑出现？质粒不是被限制性内切酶 酶切了吗？ 问题2：可以用其他方法区分B和C 细胞吗？ PCR法 酶切法 探针杂交法 今天介绍的方法直接用肉眼判断，简便而高效。 双抗性基因插入失活－影印 Thanks for your attention！ * * * *