05第五章酶活力测定法.pptVIP

第五章：酶活力测定法 第一节、酶活力测定 一、一般原则： 酶活力 反应速度 二、初速度 initial velocity 三、测定物质的选择： 底物的减少量、产物的增加量 四、动力学因素的影响： pH、温度、离子强度、效应物浓度、E浓度、底物浓度 第二节：酶活力单位： 一、 一个酶活力单位 Active Unit 定义：在特定条件下，一分钟内催化1?mole底物反应的酶量。 其它习惯用法： 二、比活力: Specific activity 比活力定义：每毫克酶蛋白所含酶活力单位数 三、转换数 Turnover number T.N.值 分子活力、克分子活力 定义：1克分子酶在最适条件下，1分钟转化底物的克分子数； 举例说明计算方法： 第三节、酶活力测定的主要方法 一、化学法：终止反应法： 方法、优点、缺点 二、光学法：连续反应测定法 1.紫外、可见光吸收测定法 2. 荧光测定法 三、电化学测定法：连续分析法 1.离子选择性电极测定法、2.氧电极测定法 3.电流测定法 四、放射化学测定法： 同位素标记： 14C、 32P 、35 S 、 131I 五、酶偶联分析法： 酶偶联法是应用过量、高度专一的“偶联工具酶”使被测定的酶反应能继续进行到某一个可以直接、连续、简便、准确测定阶段的方法 例如：己糖激酶 HK 活力测定： G + ATP G-6-P + ADP