生化分离实验蛋白质.pptVIP

过氧化氢酶又称触酶，是一类广泛存在于动物内脏，植物和微生物体内的末端氧化酶。过氧化氢酶专一分解过氧化氢，溶于水，几乎不溶于乙醇，氯仿，乙醚。过氧化氢酶是在生物演化过 程中建立起来的生物防御系统的关键酶之一，其 生物学功能是催化细胞内过氧化氢分解，防止脱 脂过氧化。迄今为止，过氧化氢酶已经成为农业，食品业，乳制品业，纸浆和造纸业，以及农业环保产业中有应用价值的酶之一。 实验原理 匀浆使细胞破碎，让细胞中的蛋白质释放。用重金属盐沉淀，高速离心使产物与杂蛋白分离。凝胶柱利用凝胶粒子为固定相，根据料液中溶质相对分子质量的差别分离出所需的蛋白质。再用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，根据蛋白质的相对分子质量不同移动速度也不同，检验得到蛋白质的相对分子质量。最后用Folin-酚试剂法测蛋白质的浓度。 实验步骤 1.粗酶的提取 2.初步分离纯化 3.进一步分离纯化 4.过氧化氢酶鉴定 粗酶的提取 将10克的猪肝用剪刀剪碎，以料水质量比1:5的比例加水研磨，在高速匀浆机的作用下将其打成肝糜，用高速离心机12000rpm下离心15min，取上清液，即为粗酶液。 初步分离纯化 在粗酶液中缓慢加入硫酸铵粉末，配制为30%的溶液，用玻璃棒搅拌15min。再在高速离心机中12000rpm下离心15min，取上清液。将得到上清液放入盐析袋中盐析过夜。 进一步分离纯化 由于盐析后的溶液中仍含有大量的杂蛋白，为防