重组质粒的转化研究报告.pptVIP

重组质粒的转化 外源DNA与载体分子的连接即为DNA重组技术，重组的DNA分子式在DNA连接酶的作用下，有Mg2+、ATP存在的连接缓冲系统中，将分别经限制性内切酶酶切的载体分子和外源DNA分子连接起来。将重组质粒导入感受态细胞中，将转化后的细胞在选择性培养基中培养，可以通过各种方法筛选出重组子，并可通过酶切电泳进行重组子的鉴定。 感受态 理化方法诱导细胞，使其处于最适摄取和容纳外来DNA的生理状态。它决定于受体菌的遗传特性，同时与菌龄、外界环境等因素有关。 感受态细胞制备方法及原理 目前常用的感受态细胞制备方法有CaCl2法，制备好的感受态细胞可以加入终浓度为15%的无菌甘油，-70℃可保存半年至一年。经过CaCl2处理的细胞细胞膜通透性增加，允许外源DNA分子进入。 该方法简便、快速、稳定 将快速生长的大肠杆菌置于经低温（0℃）预处理的低渗氯化钙溶液中，便会造成细胞膨胀，细胞膜通透性发生变化， CaCl2法制备感受态细胞 影响因素 细胞的生长状态：对数生长期 试剂质量：分析纯 杂菌和杂DNA污染：所用器皿、试剂均需灭菌 温度：冰上操作 转化 是某一基因型的细胞从周围介质中吸收来自另一基因型的细胞的DNA而使它的基因型和表型发生相应变化的现象。 在低温下，将携带有外源DNA片段的载体与感受态细胞混合，经过热激或电穿孔技术，使载体分子进入细胞。 进入受体细胞的外源DNA分子通过复制