第二章酶的发酵工程.ppt

RNA合成过程 RNA链的延伸图解 蛋白质的合成过程 （大肠杆菌） （一）基因调控理论  Jacob and Monod的操纵子学说（operon theory） 　 调节基因(regulator gene)： 可产生一种组成型调节蛋白(regulatory protein) （一种变构蛋白），通过与效应物(effector) （包括诱导物和辅阻遏物）的特异结合而发生变构作用，从而改变它与操纵基因的结合力。 调节基因常位于调控区的上游。 2.末端产物阻遏 由某代谢途径末端产物的过量累积引起的阻遏。 酶合成阻遏的现象： 实验： （1）大肠杆菌生长在无机盐和葡萄糖的培养基上时， 检测到细胞内有色氨酸合成酶的存在； （2）在上述培养基中加入色氨酸，检测发现细胞内色氨酸合成酶的活性降低，直至消失。 （3）表明色氨酸的存在阻止了色氨酸合成酶的合成，体现了菌体生长的经济原则:不需要就不合成。 色氨酸操纵子——酶的阻遏 酶的诱导和阻遏操纵子模型 3.分解代谢物阻遏 指细胞内同时有两种分解底物（碳源或氮源）存在时，利用快的那种分解底物会阻遏利用慢的底物的有关酶合成的现象。 分解代谢物的阻遏作用，并非由于快速利用的甲碳源本身直接作用的结果，而是通过甲碳源（或氮源等）在其分解过程中所产生的中间代谢物所引起的阻遏作用。 分解代谢物阻遏现象： 实验：细菌在含有葡萄糖和乳糖的培养基上生长，优先利用葡萄糖。待葡萄糖耗尽后才开始利用乳糖，产生了两个对数生长期中间隔开一个生长延滞期的“二次生长现象”(diauxie或biphasic growth）。 分解代谢物阻遏 第二节 酶发酵动力学 一、细胞生长动力学 在分批培养(batch culture)过程中，细胞生长一般要经历延迟期、指数生长期、减速期、静止期和衰亡期5个阶段。 营养物浓度（生长限制基质浓度）和生长速率之间的动力学关系：Monod模型 μ:比生长速率（1/h） （specific growth rate） μmax：最大比生长速率（1/h） S：营养物浓度（生长限制基质浓度） 克/L Ks：莫诺德常数或饱和常数或营养物利用常数 克/L，或 mol/L 植物、动物、微生物细胞的特性比较 悬浮培养 让细胞自由的悬浮于培养基内生长繁殖的培养方法。 优点：操作简单，培养条件均一，保质供氧好，容易扩大培养规模。但对于大多数具有锚地依赖性的动物细胞，不能采用悬浮培养方式。 贴壁培养 让细胞贴附在某种基质上生长繁殖的培养方式。优点与悬浮培养正好相反。 缺点：操作麻烦，需要合适的贴附材料和足够的面积，培养条件不易均一，保质和供氧较差。 贴壁－悬浮培养 又称假悬浮培养，将悬浮培养和贴壁培养巧妙结合的培养方法，包括： a、? 微载体培养(microcarrier culture) 将葡聚糖等微小颗粒加入到培养基，动物细胞可贴附在颗粒表面生长。 特点：贴附面积大，供细胞贴附生长繁殖；载体体积小，比重轻，可悬浮在培养基内。 b、? 包埋(entrapment)和微囊(microencapsulation)培养 与微载体的不同之处：细胞不是贴附在载体表面，而是被包埋或包裹在凝胶载体内。 优点：保护细胞免受剪切力的损害；实现动物细胞高密度大规模培养；有利于下游产物纯化。 c、? 结团培养(aggregate culture) 利用细胞本身作为基质，相互贴附后，再用悬浮法培养。 优点：操作简便，节省了用微载体的成本。 酶发酵生产的一般工艺流程 第四节 动、植物细胞培养产酶 与微生物细胞相比，动物细胞和植物细胞具有各自不同的特性，需采用各自不同的培养工艺。 动物细胞模式图 植物细胞结构 疫苗、激素、单克隆抗体、酶等 醇、有机酸、氨基酸、抗生素、核苷酸、酶等 色素、药物、香精、酶等 主要产物 非常敏感 大多数不敏感 敏感 对剪切力 不要求 不要求 大多数要求 光照要求 复杂 简单 简单 营养要求 ﹥15 0.3-6 ﹥12 倍增时间/h 10～100 1～10 200～300 细胞大小/um 动物细胞 微生物细胞 植物细胞 细胞种类 三者之间的差异主要有： 植物细胞动物细胞微生物细胞。 动物细胞、植物细胞的生产周期比微生物长。 植物细胞和微生物细胞的营养要求较简单。 植物细胞的生长以及次级代谢物的生产要求一定的光照。 植物细胞和动物细