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以木质纤维为原料的产油微生物的筛选及特性研究 研究背景 随着现代社会工业化程度的提高，人类所面临的能源和环境压力日益增大。为打破传统能源危机带给人类的束缚和危害，世界各国均大力发展可再生能源。近年来，人类所需的油脂总量仅仅靠植物油脂和动物油脂来提供已经出现了很大的问题，寻找其它油脂原料来生产人们所需油脂变得越来越重要。另外，伴随着价格日益攀升并且不可再生的资源石油的日渐枯竭，利用其它可再生资源生产能源就成了必然趋势。利用微生物产油这一新的研究方向日渐被众多的研究人员所关注。微生物油脂是制取生物柴油的优质原料，微生物油脂还含有对人体健康有利的多种不饱和脂肪酸，因此，在改善人类人体健康程度和医疗保健方面具有重要的开发和利用价值[1]。 目前工业化生产生物柴油的原料主要以植物油为主，但原料成本占到总成本的70%～85%[2]。那么，寻求能够低成本替代现行生物柴油的生产原料就变成了一个迫切需要解决的问题。产油微生物具有资源丰富、油脂含量高、碳源利用谱广等特点，开发潜力大，因此微生物油脂具有良好的发展前景，可能在未来生物柴油产业中发挥重要的作用。微生物油脂又称为单细胞油脂(Single Cell Oil，SCO）C16、C18系脂肪酸，如棕榈酸、硬脂酸、油酸和亚麻酸等。某些微生物如细菌、酵母、霉菌、微藻能够利用碳水化合物、碳氢化合物或普通油脂作为碳源积累油脂，如果微生物油脂积累量超过细胞总量的20%，即被称为产油微生物(Oleaginous microorganisms)[3]。 生物柴油即采用动植物油脂等原料（主要成分为脂肪酸甘油酯）与短链醇（主要是甲醇和乙醇）在催化剂（酸、碱和酶）或超临界的条件下，经过酯化和酯交换反应生成的脂肪酸短链酯。生物柴油因使用时环境污染物释放量少、使用安全、可生物降解等特性，成为当今国际新能源开发的热点。目前在世界范围内掀起了生物柴油的研发热潮，谁先拥有了这项技术必然抢占世界市场先机，造福于人类社会。于是先有美国的大豆生产生物柴油；后有东南亚地区的棕榈油生产生物柴油；远有欧洲各国，尤其是德国的菜籽油生产生物柴油；近有日本的餐饮废油生产就生物柴油[5-7]。中国油脂年产量约1440万吨，人均年消费约为8kg，远低于国际标准24kg的推荐量。我国的生物生物柴油产业不能够大范围发展的主要原因有，国内食用油现存量不能够满足现实所需，部分缺口需要以进口的方式进行补充[8]；而现实存在的地沟油等获取量不固定同时又存在地区局限性，给它们的充分利用带来了较大的困难，综上所述，生物柴油产油原料的开发和获取就成为了生物柴油产业中非常关键的核心问题。 文献综述 2.1微生物油脂的研究进展 目前，国内外关于利用微生物生产油脂的报道现在主要集中在四个方面：一是从发酵工程的角度，通过优化发酵工艺来增加油脂产量：碳源、氮源的种类和碳氮比、接种量、发酵时间、培养温度、培养基初始pH值以及油脂提取方法等都对油脂的产量和油脂脂肪酸组成有很大影响[9]；二是通过诱变方法[10]或基因工程手段[11]得到或发现新的高产油脂的微生物；三是对产油微生物机理的研究：国际上关于产油微生物甘油三酯的合成和积累机理研究已经取得了巨大进展，例如已初步阐明AMP脱氨酶、ATP：柠檬酸裂解酶、苹果酸酶与甘油三酯合成积累的关系[12,13]等；四是利用各种廉价原料生产微生物油脂，以降低其生产成本。 微生物细胞通常含有2%~3%的油脂，但经过选育，某些微生物的干菌体含脂量可达60%左右[14]，施安辉[15]等通过紫外诱变育种和优化摇瓶培养条件，通过培养后期补加碳源的方法培养，最终GLR513菌株油脂产量可达菌体干重的67.2%。刘淑君[16]等经紫外线和EMS复合诱变选育出一株高产油脂的优良酵母菌株，油脂产量5.9g/L；菌体生物量11g/L；油脂含量53.6%。刘玲[17]等对红酵母进行物理和化学诱变，对影响红酵母油脂合成的主要因素进行了研究红酵母的油脂含量可达43.6%。曲威[18]等以斯达氏油脂酵母Lipomyces starkeyi AS 2.1560为出发菌株，经紫外线诱变选育出了一株高产油脂的优良酵母菌株L.starkeyi M36，通过摇瓶培养，对与菌体产油脂相关的因素进行了单因子试验，最后可得生物量24.2g/L；油脂量14.6g/L，测得菌体油脂肪酸组成分析结果如下：豆蔻酸0.5%，软脂酸35.2%，棕榈油酸4.3%，硬脂酸4.4%，油酸53.0%，亚油酸2.6%；李永红[19]等采用均匀设计和单因子试验法，系统考察了圆红冬孢酵母菌（Rhodosporidium toruloides）76.1%，脂肪得率系数可达22.7。孔祥莉[20]等了斯达氏油脂酵母Lipom yces starkey i 2#利用葡萄糖-木糖混合糖为碳源生长和油脂积累特性