参考资料--乳酸测定方法的初步研究.docVIP

乳酸测定方法初步研究 摘要 乳酸是重要的生化产品，广泛应用于食品、医药、环保等各领域，目前L-乳酸的主要生产方法为微生物发酵法。近年来由于其可用于合成可降解塑料——聚乳酸的性质而受到众多的关注，具有广阔的市场前景。本研究利用薄层色谱、EDTA和对羟基联苯法建立了乳酸的定性定量检测方法，并对实验条件范围进行了研究，结果如下： 1、得到了分离提纯精制L-乳酸的具体参数：实验分别在55℃、60℃、65℃、70℃四个温度下直接用50%的稀硫酸酸解浓缩的乳酸钙溶液，用0.1%甲基紫溶液作为指示剂对粗L-乳酸进行了精制。在此范围内均可得到纯度大于90%的乳酸，精制后的乳酸颜色清澈，对精制的乳酸进行第二次分子蒸馏得到了结晶乳酸。采用分子蒸馏技术精制L-乳酸，在操作压力为0.1Pa，蒸馏温度为70℃效果最好，同时实验发现适宜的蒸馏温度应低于75℃。 2、确定了乳酸的薄层定性分析条件，实验结果表明，定性分析方法效果良好；方法简单，精确度高，显色稳定，重复性好，可应用于乳酸含量的测定。 3、确定了利用EDTA法测定乳酸的可行性。在消除其他离子干扰的前提下，钙离子可迅速与乙二胺四乙酸二钠反应，以钙—经酸为指示剂，用EDTA标准溶液滴定，溶液成纯蓝色为滴定终点，用滴定消耗的EDTA体积和摩尔浓度可求得乳酸钙的含量。 4、在一定浓度范围内，乳酸含量与 565 nm 处波长吸光度呈线性关系，因此，可以通过测定 565 nm 处的吸光度来测定乳酸的含量。通过实验证明此方法可行并且快速有效。 5、用DNS法测定残糖含量中。以葡萄糖的浓度Y（mg/ml）对540nm分光光度值，进行线性回归，其回归方程为Y=1.4163X+0.0255，相关系数为0.9988。为以后测定发酵液中残糖含量奠定了基础。 关键字：L-乳酸，精制，测定，分离，含量 目录 前言 - 2 - 第一章 文献综述 - 2 - 1.1 乳酸的性质 - 2 - 1.1.1 乳酸的分子结构 - 2 - 1.1.2 乳酸的理化性质 - 3 - 第二章 乳酸测定方法研究 - 3 - 2.1引言 - 3 - 2.2 发酵液中L-乳酸的分离精制 - 4 - 2.2.1 仪器与方法 - 4 - 2.2.1.1仪器及试剂 - 4 - 2.2.1.2 实验方法 - 4 - 2.2.1.3结果与讨论 - 5 - 2.3 同型、异型乳酸发酵的确定（薄层色谱） - 6 - 2.3.1 仪器与方法 - 6 - 2.3.1.1仪器及试剂 - 6 - 2.3.1.2实验方法 - 6 - 2.3.1.3结果与讨论 - 7 - 2.4 乳酸含量测定 - 8 - 2.4.1 EDTA滴定法确定乳酸含量仪器与方法 - 8 - 2.4.1.1仪器及试剂 - 8 - 2.4.1.2实验方法 - 9 - 2.4.1.3结果与讨论 - 9 - 2.4.2 分光光度法标准曲线确定乳酸含量仪器与方法 - 9 - 2.4.2.1仪器及试剂 - 9 - 2.4.2.2实验方法 - 10 - 2.4.2.3结果与讨论 - 10 - 2.5 残糖含量的确定（DNS法） - 12 - 2.5.1 仪器与方法 - 12 - 2.5.1.1仪器及试剂 - 12 - 2.5.1.2实验方法 - 12 - 2.5.1.3结果与讨论 - 12 - 第三章 结论 - 13 - 3.1 结论 - 13 - 参考文献 - 13 - 致 谢 - 14 - 前言 乳酸是重要的生化产品，广泛应用于食品、医药、环保等各领域，目前L-乳酸的主要生产方法为微生物发酵法。乳酸发酵液的成分复杂，并且因原料和发酵工艺不同而各不相同。除乳酸外，发酵液中还包括菌体、残糖、蛋白质、色素、胶体、有机杂酸、无机盐等多种杂质，因此从乳酸发酵液中提取乳酸是比较困难的。要得到精制乳酸就必须对其进行再加工，除去其中含有的有机物杂质。在国际上食品级的乳酸价格在 52 美分/磅，而精制的乳酸价格在 1 美元/磅，两者的价格差很大。 本文围绕上述问题进行了一系列的研究。首先，进行了细菌乳酸发酵的提纯分离精制的研究，特别是温度对提纯过程的影响，其次，利用薄层色谱法、EDTA法、DNS法、分光光度法进行了对发酵液中乳酸测定研究，为实验室规模分析和制备高纯L-乳酸的工艺的提供了实验和理论依据。 第一章 文献综述 1.1 乳酸的性质 1.1.1 乳酸的分子结构 乳酸，英文名 Lactic acid，学名为α-羟基丙酸 (α-hydroxypropanoic acid)，分子式为 C2H5O COOH，分子量 90.08，是一种天然存在的有机酸，广泛存在于人体、动物、植物和微生物中。 乳酸分子内含有一个不对称的C原子，因此具有旋光性，从而具有D-型和L-型两种构型。L-乳酸为右旋，D-乳酸是左旋的，DL-