IL7联合IL2对脐血CD4CD25T%7f细胞体外诱导扩增影响研究.pdf

·- 11· ￥Plitt:~ ~ tL it Jt ~!k -Btl ~~::t]E fl)j *A~m~~= m~~~~~~~. ~*A~~~m~~*fr~~~I~ H~m~~~~*·~ftM~. ~T~~~~~~~~~~W~~~#. ~~ ~ ~ EL15 ;!t1mA s ~￡it* EX:m ~ ~ :PJf~~*, m ~ E1 ~ :71 g:ftf~1PJ i ~*~ mz:ft 1m~ Wm~~~~ElX:hl~M~ffltt~Mfl.~ft-~I~~~~M*~~M~~ffW ~~~B~~~~~T~~~~#*~T~W. ii?;~. -- ·- 11· f·- *A~ $i~~PI~~*~~1fl~mY:Bl~ § ~ c l)_-7 ~ ZL-Bt~ fiL.oJ1 co~ 1~4~~ {1}~~~~-t~~ ~JDr€) ~4~t~ 81 ~ 1fl it X, ~ ft 1 A :tE -B: Yf!J c .# r￡ ) tlt -B: # ~ -B: Yf!J il1t r ~ 1~ 81 11Jf Yi JJX: ~ , 11Jf Yi I 1t JJz 1lX 1~ 81 11Jf JEJJ)G ~~am~~*~ ?JT m 1Jt FtJ 11Jf Yi ? ~ JJz ~ Yf!J 81 11Jf Yi ~ Jt fF=~~;g: ie ~~ El ,ltJj: )oil/- if 6 Jj .\ Fl ~yfl]~!b: ~l~V\~ B :H:JJ / : ).,:;Jlt if _ft__jj { R 摘 要 I 摘 要 背景：目前世界上常见的自身免疫性疾病有类风湿性关节炎、甲状腺炎、白癜风、 恶性贫血、Ⅰ型糖尿病和全身性红斑狼疮等，且都与体内 CD4+CD25+调节性 T 细胞的 数量密切相关，研究证实疾病活动度越高的患者，其体内 CD4+CD25+调节性 T 细胞数 量越低。因此，将 CD4+CD25+调节性 T 细胞应用于自身免疫性疾病的过继免疫治疗具 有十分重要的意义，但由于 CD4+CD25+Tregs 在体内增殖活性低下，其存在比例和绝对 数量极低，且诱导产生的 CD4+CD25+调节性 T 细胞中 Foxp3 表达不稳定，使 CD4+CD25+ 调节性 T 细胞的来源问题成为了自身免疫性疾病治疗的瓶颈，从而限制了 CD4+CD25+ 调节性 T 细胞的临床应用。因此，本研究致力于建立一种体外诱导 CD4+CD25-T 细胞向 CD4 + CD25 +调节性 T 细胞转化的培养体系，为 CD4+CD25+调节性 T 细胞的临床应用奠 定基础。 方法：采用免疫磁珠分选法分选出脐血 CD4+CD25-T 细胞和 CD4+CD25+T 细胞；加 入不同浓度的细胞因子 IL-7 结合适当浓度的 IL-2 作为诱导剂，分析 IL-7 体外诱导 CD4 + CD25 - T 细胞增殖的有效性及最适浓度。我们利用流式细胞术检测体外扩增后的 CD4 + CD25 - T 细胞表型变化；MTS 法检测体外诱导扩增的 CD4+CD25+Tregs 及自然分选 的 CD4+CD25+Tregs 分别对成人外周血中单个核细胞脐血 CIK 增殖的抑制作用；RT-PCR 方法分析体外诱导扩增的 CD4+CD25+Tregs 及自然分选的 CD4+CD25+Tregs FOXP3 基 因、IL-10 基因和 TGF-β 基因的 cDNA 表达的变化。 结果：经 3 周体外培养、各组细胞均有明显的扩增。IL-7 诱导组的扩增最强。体外 抑制试验显示体外扩增的 Tregs 对成人外周血中单个核细胞和脐血 CIK 有明显的抑制作 用，IL-7 联合 IL-2 诱导 CD4+CD25-T 细胞生成的 CD4+CD25+Tregs 具有较自然分选的 CD4 + CD25 + Tregs 稍弱的免疫抑制功能，其中 IL-7 浓度为 4ng/ml，IL-2 浓度为 2000U/ml 时诱导 CD4+CD25-T 细胞生成的 CD4+CD25+Tregs 杀伤活性最强。 结论：成功建立了 CD4+CD25+Tregs 的体外培养体系，联合应用 IL-7、大剂量的 IL-2 和CD3/CD28单抗是体外诱导扩增CD4+CD25-T细胞成为CD4+CD25+Tregs的优选方法， 并且扩增倍数高、可持续高表达 CD4 及 CD25 细胞表型。 关键词：白介素-7；脐血；CD4+CD25- T 细胞；调节性 T 细胞 Abstract II Abstract Objectives: Currently, the worldwide common autoim