五_DNA的粗提取与鉴定说课.pptVIP

讨论： 答：有丝状物的试管变成蓝色，另一试管还是原来颜色 （2）这一鉴定结果说明什么问题？ （1）比较两个试管中溶液的颜色有什么不同？ 答：提取出的丝状物是DNA （3） DNA的直径约为20×10-10 m，实验中出现的丝状物的粗细是否表示1个DNA分子直径的大小？ 答： DNA分子直径只有2 nm。丝状物是多个DNA子聚在一起形成的 答：整个实验共“两次蒸馏水，三次过滤，两次析出，六次搅拌” 6、讨论： ①两次蒸馏水 第一次：细胞吸水涨破 第一步 第二次：使 DNA黏稠物析出 第三步 （1）此实验过程中有几次使用蒸馏水？几次过滤，几次析出，几次搅拌？分别在哪一步？ 过滤时使用的纱布层数与需用滤液或黏稠物有关，第二次要用其滤出的黏稠物有关，所以要使用多层纱布，第一次和第三次均要用其滤液，使用的纱布为1－2层 ②三次过滤 第一次： DNA存在于滤液里 第一步 第二次： DNA被留在纱布上 第四步第三次： DNA存在于滤液里 第六步 ③两次析出 第一次：用0.14 mol／L 的NaCI溶液含杂质多 第三步 第二次：用冷却的95％的酒精 第七步 ④六次搅拌：第一、二、三、五、七、八步 其中除第八步外，其余均要朝一个方向搅拌，在第三、五步搅动还要轻缓，玻璃棒不要直插烧杯底部，这样才能保证得到完整的DNA （2）为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？ 答：用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质 （二）案例二：以菜花为实验材料进行DNA的粗提取 1、课前准备 将新鲜菜花和体积分数为95％的乙醇溶液放入冰箱冷冻室24 h 2、提取DNA的具体步骤 ①取材：称取30 g菜花，去梗取花，切碎 ②研磨：将碎菜花放入研钵中，倒入10 mL研磨液，充分研磨10 min 研磨液的配制方法如下：将10.1 g Tris加入到50 mL蒸馏水中，使其溶解，然后，用2 moL/L的HCl溶液调节pH至8.0，再加入8.76 g NaCl 、37.2 g EDTA 、20 g SDS。待上述药品全部溶解后，再用蒸馏水定容至1 000 mL Tris/HCl:提供缓冲体系，DNA在这一体系中呈稳定态（Tris为三羟甲基氨基甲烷） EDTA（乙二胺四乙酸二钠）：是DNA酶的抑制剂，可以防止细胞破碎后DNA酶降解DNA SDS（十二烷基磺酸钠）：可以使蛋白质变性，与DNA分离 ③过滤：在漏斗中垫上尼龙纱布，将菜花研磨液过滤到烧杯中(有条件的学校可将滤液倒入塑料离心管中进行离心，用1000 r/min的转速，离心2～5 min，取上清液放入烧杯中)。在4 ℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液 ④沉淀：将一倍体积的上清液倒入两倍体积的体积分数为95％的预冷乙醇溶液中，并用玻璃棒缓缓、轻轻地搅拌溶液(玻璃棒不要直插到烧杯底部)。沉淀3～5 min后，可见白色的DNA絮状物出现。用玻璃棒缓缓旋转，将絮状物缠绕在玻璃棒上 观察你提取的DNA颜色，如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多；二苯胺鉴定出现蓝色说明实验基本成功，如果不呈现蓝色，可能所提取的DNA含量低，或是实验操作中出现错误，需要重新制备 四、课题成果评价 （一）是否提取出了DNA 本实验提取的DNA粗制品有可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质 （二）分析DNA中的杂质 （三）不同实验方法的比较 对于不同的实验方法，本课题可以采用分组的方法进行研究。首先选取不同的实验材料，其次同种材料还可以采用不同方法，从多方面比较实验结果，如DNA的纯度、DNA的颜色、二苯胺显色的深浅等，看看哪种实验材料、哪种提取方法的效果更好 课题五 DNA的粗提取与鉴定 一、基础知识 （一）提取DNA的方法 1、提取生物大分子的基本思路 选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子 2、生物大分子 主要指蛋白质、酶和核酸 3、提取DNA的基本思路 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分 4、DNA的溶解性 DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反 5、讨论： ①根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下， DNA的溶解度最小？ DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？ 在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14 mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时