19.希尔反应的观察和反应速率的测定.pptVIP

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2016-08-03 发布于天津
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19.希尔反应的观察和反应速率的测定.ppt

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19.希尔反应的观察和反应速率的测定

* 19.希尔反应的观察和反应速率的测定实验原理希尔发现，离体叶绿体悬浮液在光下能还原某些氧化剂（如2,6 -二氯酚靛酚、高铁氰化钾、苯醌、NADP+、草酸等） 2H2O+2A 2AH2+O2 希尔反应的测定的方法是（1）放氧速率；（2）氧化剂被还原的速率。本实验中2,6 -二氯酚靛酚还原后，溶液由兰色变为无色。实验目的观察和测定希尔反应，了解叶绿体在光合放氧中的作用。实验器材和试剂实验材料：菠菜实验器材：离心机、分光光度计、天平、研钵、漏斗、容量瓶、量筒、烧杯、纱布、移液管、台灯等实验试剂：（1）提取液（0.067M 磷酸缓冲液，pH 6.5 + 0.3M 蔗糖 + 0.01M KCl）；（2） 0.1% 2,6 -二氯酚靛酚（溶于0.067M 磷酸缓冲液+0.01%KCl）实验步骤 1.离体叶绿体悬浮液的制备称取8克叶片,加10ml预冷提取液研磨,在研钵中捣碎30秒钟后,继续加入15ml冷提取液; 经过二层纱布过滤,去残渣,挤出滤液,置于离心管中。以1000转/分离心3分钟;弃去沉淀。以3000转/分离心上层液,8分钟,弃去上清液,沉淀为破碎的叶绿体。用20ml提取液悬浮沉淀,置于冰浴备用。 2.离体叶绿体对2,6 -二氯酚靛酚的还原作用取2支试管，分别加入5ml叶绿体悬浮液和5ml 0.1%的2,6 -二氯酚靛酚。一试管照光，另一试管置于黑暗。5-10min后观察溶液颜色的变化。实验步骤 3.希尔反应速率的测定 1.5ml 1.5ml ---- 0.1 0.1 0.1 9.0 9.0 9.0 1包裹锡纸 2 3 0.1M 2,6 -二氯酚靛酚叶绿体悬浮液（ml） 0.1M 磷酸缓冲液pH6.5（ml）试管编号（1）加样实验步骤（2）操作步骤实验步骤 600nm波长下,测定三个处理的光密度; 放回水浴中照光3分钟; 搅匀叶绿体悬浮液,进行比色; 如此重复5-6次; 将实验结果绘制成曲线，进行分析。 3.希尔反应速率的测定 *