专题2微生物的培养与应用第一轮复习要点.pptVIP

⑵稀释涂布平板法： 涂布平板： 不超过0.1ml 各梯度分别涂布3个平板 1个不涂布作空白对照 滴 灼 试 涂 稀释103倍 稀释104倍 稀释105倍 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。 测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到 伊红美蓝 培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记述得出水样中大肠杆菌的数量。 酚酞和酚红有什么区别 酚酞 酚红 酚红指示剂是由酚红所配制成的0.02~0.05%的醇溶液。当被测溶液的pH值小于6.8，则指示剂呈现黄色的酸性反应；若被测溶液的pH值大于8.4，则指示剂呈现红色的碱性反应 酚酞是一种弱有机酸，在pH＜8.2的溶液里为无色的内酯式结构，当pH＞10时为粉红色的醌式结构，是一种常用的酸碱指示剂（变色范围pH值8.2-10.0，由无色变红色）。 酚酞的醌式或醌式酸盐，在碱性介质中很不稳定，它会慢慢地转化成无色羧酸盐式；遇到较浓的碱液，会立即转变成无色的羧酸盐式。所以，酚酞试剂滴入浓碱液时，酚酞开始变红，很快红色退去变成无色。 课题3 分解纤维素的微生物的分离 一、纤维素与纤维素酶 纤维素（cellulose）是由葡萄糖组成的大分子多糖。纤维素是自然界中分布最广、含量最多的一种多糖，占植物界碳含量的50%以上。棉花的纤维素含量接近100%，为天然的最纯纤维素来源。植物每年产生的纤维素超过70亿吨；分布植物的根、茎、叶中。 许多商品纤维素都是由天然纤维素制得:如水溶性的羧甲基纤维素钠(CMC--Na);不溶于水的微晶纤维素等食品添加剂。 纤维素是重要的造纸原料，此外广泛用于塑料、炸药、电工及科研器材等方面。 纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶(外切酶)、CX酶(内切酶)和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。 纤维素酶广泛存在于自然界的生物体中。细菌、真菌、动物体内等都能产生纤维素酶。一般用于生产的纤维素酶来自于真菌。 纤维素酶的活性测定实验——滤纸崩溃法 二、纤维素分解菌的筛选 纤维素分解菌的筛选方法 刚果红染色法：这种方法能够通过颜色反应直接 对微生物进行筛选 纤维素分解菌的筛选方法的原理 刚果红是一种染料，它可以与纤维素形成红色复合物，但并不和纤维二糖、葡萄糖发生这种反应。当纤维素被纤维素酶分解后刚果红—纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解为中心的透明圈。这样我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌 三、实验设计 实验原理： ①土壤中存在着大量纤维素分解酶，包括真菌、细菌和放线菌等，它们可以产生纤维素酶。纤维素酶是一种复合酶，可以把纤维素分解为纤维二糖，进一步分解为葡萄糖使微生物加以利用，故在用纤维素作为唯一碳源的培养基中，纤维素分解菌能够很好地生长，其他微生物则不能生长。 ②在培养基中加入刚果红，可与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，红色复合物不能形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，从而可筛选纤维素分解菌。 1、土壤取样 选择纤维素丰富的环境，如树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等等。生物与环境的互相依存关系，在富含纤维素的环境中纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土壤中获得目的微生物的几率要高于普通环境。 2、选择培养*（此步可以省略） 选择培养的目的：增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物。可用用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照。 操作方法： 将土样加入装有30ml选择培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下震荡培养1～2天，直至培养液变浑浊。也可重复选择培养。 在选择培养的条件下，可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖，而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“浓缩”的作用 本配方中的碳源是纤维素，所以能分解纤维素的 微生物可以大量繁殖，有选择作用。 3、梯度稀释 按照课题1 的稀释操作方法，将选择培养后的培养基进行等比稀释，稀释最大倍数到106。 4、将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的固体培养基上培养基上 1、制备培养基:参照旁栏中的比例。 2、涂布平板：将稀释度为104～106的菌悬液各取0.1ml涂布在培养基上，30℃倒置培养。 刚果红染色法 方法一：先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应。 方法二：在倒平板时就加入刚果红。 缺点:是操作烦琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发 生混杂； 优点:是这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用。 优点:是操作简便，不存在菌落混杂问题； 缺点:一是由于培养基中还含有淀粉类物质，可以使能产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应； 缺点:二有些微生